细菌鉴定方法.doc

细菌鉴定方法.doc《常见细菌系统鉴定手册》(1999),中科院微生物所编著《一般细菌常用鉴定方法》(1978)的方法进行鉴定。芽范杆菌屈鉴定到种,参照了蔡妙英等译《芽砲杆菌屈》(1980)的方法。(1) 革兰氏染色:挑选少许菌苔,涂布于干净玻片的蒸憾水中,风干固定,结晶紫染色(结晶紫2g,,95%乙醇20ml,加水至100ml)lmin,水洗后碘液(碘lg,碘化钾2g,水300ml)作用lmim水洗,脱色,用番红O液染3min,水洗,风干,光学显微镜观察。(2) 鞭毛染色:将16〜24h菌龄的菌苔在载玻片上的水滴中轻蘸几下,将玻片倾斜,使菌液缓慢流到另一端,然后平放在空气中干燥。干燥后滴甲液(丹宁酸5g,,15%福尔马林2ml,l%NaOH1ml,蒸憾水100ml)染6〜lOmin,水洗,干燥后,用乙液(2%AgNC)3溶液)加热复染30min,蒸镭水冲洗,干燥,镜检,菌体为深褐色,鞭毛为褐色。(3) 运动性:半固体琼脂穿刺法,将菌种接在可使鉴定菌生长良好的培养基中,〜%的琼脂。适温培养,运动性可用透射光冃测,如生长菌只生长在穿刺线上,边缘十分清晰,则表明鉴定菌无运动性;如生长菌由穿刺线向四周呈云雾状扩散,其边缘呈云雾状,则表示鉴定菌有运动性。(4) 芽抱染色:孔雀绿染色法。按革兰氏染色涂片后,用饱和的孔雀绿水溶液(%)染20min,%番红O复染20〜30s,水洗,吸干,镜检。芽砲呈绿色,菌体和芽砲囊呈微红色。(5) 抗酸染色:常规涂片,石碳酸复红(10%碱性复红乙醇饱和液10ml,5%石碳酸水溶液100ml)加热染色5min,倾去染液用酸性乙醇脱色,吕氏美蓝(2%亚甲基蓝乙醇饱和液30ml,%KOH100ml。)复染2min,水洗,吸干,镜检。(6) 荚膜染色:在载片一端滴一滴无菌水,取少许菌苔在水滴中制成悬液。取一滴墨汁与菌悬液混合,并用另一载片之一端将此水滴在载片上刮成薄膜风干。用纯甲醇固定lniin,%番红O液数滴滴于涂片上,冲去残余甲醇,并染30s,然后倾去染液,立即吸干,镜检。(1)菌落形态:用划线法将菌种接在平板培养基上,适温培养1〜2d,出现单菌落开始观察,包括形状和大小,边缘,表面,隆起形状,透明度,菌落和培养基的颜色等。(2)生长温度和耐热性:将菌种转接到几支试管中,分别在不同温度下培养,每处理2管,冃测生长情况。芽孑包菌厌氧性测定:(酪素水解物20g,NaCl5g,筑基醋酸钠2g,甲基次硫酸钠lg,琼脂15g,蒸憾水1000ml),30°C培养,3d和7d分别观察,表而生长者为好氧菌,如沿穿刺线或下部生长者为兼性厌氧菌或厌氧菌。碳源利用:将菌种接种在各种碳源斜而培养基(MgSCU・,(NH4)H2PO4-,,CaCl2*,(NH4),蒸憾水1000ml,碳源分别为蔗糖、乳糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露醇等,%〜%)上,适温培养Id,以菌悬液接种,能生长者即培养基变浑浊为阳性,否则为阴性。氮源利用:将菌种接种在各种氮源斜面培养基(MgSO4-7H2