16s rdna鉴定细菌地方法.doc

16SrDNA鉴定细菌的方法细菌16SrDNA鉴定主要分为7个部分:,,电泳检测纯度与大小。。。::通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基(培养基组分过于复杂会影响DNA的提取效果,也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。)。-HCl(,,)(1L):,加浓盐酸约(70ml,60ml,42ml),高温高盐灭菌后,室温保存。冷却到室温后调pH,每升高1℃,。(Tris-HCl缓冲液(,25℃) (Tris),加水稀释至100ml。Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一)()(1L):•2H2O,(约20g),高温高压灭菌,室温保存。(•2H2O,置于1L烧杯中。,充分搅拌。(约20gNaOH)。注意:,EDTA才能溶解。。,高温高压灭菌。。)×TEBuffer(缓冲液)(,,)(1L):组分:100mMTris-HCl,10mMEDTA。1MTris-HCl(,,)取100ml,()取20ml。高温高压灭菌,室温保存。1×TEBuffer用10×TEBuffer稀释10倍即可。%SDS(W/V):称10gSDS,68℃加热溶解,。室温保存。用之前在65℃溶解。配置时要戴口罩。6、5MNaCl:,高温高压灭菌,4℃保存。7、CTAB/NaCl(10%CTAB,):,加10gCTAB(十六烷基三甲基溴化铵),加热搅拌。用之前在65℃溶解。8、氯仿/异戊醇:按氯仿:异戊醇=24:1(V/V)的比例加入异戊醇。9、酚/氯仿/异戊醇(25:24:1):按苯酚与氯仿/异戊醇=1:1的比例混合Tris-HCl平衡苯酚与氯仿/异戊醇。10、TAE缓冲液:使用液1×:-乙酸,。浓储存液50×:242gTris,,()。11、6×上样缓冲液(100ml):%溴酚蓝(BPB),40%蔗糖,10mmol/LEDTA()(),4℃保存。12、%琼脂糖凝胶:。13、EB:10mg/ml。称取1g溴化乙锭定容至100ml。棕色瓶室温避光保存。。。(因EB是剧毒物质,目前很多实验室用生物