白细胞计数实验报告样稿样稿.doc

白细胞计数和分类
目标：掌握血涂片制备操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、
原理：多种白细胞必需经过染色，才易于区分其类别。常见者为瑞氏（Wright’s）染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中多种白细胞相对比值，以观察其数量、形态和质量改变，经过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞绝对值。
试验器材： 香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、~、蒸馏水、计数板及专用盖片、针 1ml刻度移液管、1ml EP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片
试验步骤
白细胞分类
1．血片制作：
取一滴血，滴于洁净无油脂玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当和血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。以后以二玻片约呈30—45度角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好血涂片晾干，不可加热。
注：（1）良好涂片标准：
１) 呈头、体、尾舌形
２) 血膜厚薄适宜
３) 两边留有空隙
（2）涂片好坏和下列原因相关：
1）血滴大小
2）推片和玻片之间角度
3）推片速度
2、血涂片染色步骤：
（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。
（2）
滴加瑞氏染液，累计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。
（3）再滴加等量磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液和缓冲液混合均匀，静置15分钟。
（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，不然沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸收水分快速干燥，即可镜检。
3、白细胞分类计数：先用低倍镜检验涂片及染色是否均匀。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均匀处（通常在体尾交界处），在油镜下由此处开始按其形态特征进行分类计数，计数移动时避免反复。依据所见到100个白细胞，统计多种白细胞所占百分数。
4、各类白细胞形态特征
嗜中性白粒细胞：圆形，胞浆淡红色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒（染色不佳时则看不清楚）。核为蓝紫色。
嗜酸性白细胞：大小、形态和中性白细胞大致相同，唯胞浆内含有粗大鲜红色颗粒。核多数为两叶。
嗜碱性白细胞：大小、形态和中性白细胞大致相同，但胞浆内含有粗大深蓝色，常遮盖在核上。核分叶不显著
淋巴细胞：分大小两种，小淋巴细胞圆形，核染成深紫色，圆形或肾形，胞浆极少，常呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞，核圆形或肾形，胞浆相对较多，染整天蓝色，在胞浆和核之间有淡染带。有时内含少数紫红色大颗粒。
单核细胞： 核染成紫色，其染色质疏松，核形不规则。胞浆较多，染成浅灰蓝色
白细胞计数
加稀释液 。
吸收血液 用微量吸管吸收新鲜全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液底部，轻轻放出血液，并吸收上层白细胞稀释液清洗吸管2-3次
混匀 将试管中血液和稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色
冲池 再次将小试管中细胞悬