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第一章 地衣共生菌藻分离和培养
地衣是一个真菌, 由地衣共生菌和一个藻类或蓝细菌（蓝藻）共生而形成联合体, 属“二元”生物体。 在这个二元共生联合体中, 真菌菌丝缠绕大量光合细胞。 在上述地衣定义我们能够提出这么一个问题: 地衣是否可分为单个生物体？地衣生物学研究很多方面均包含到这些不一样有机组织相互作用。 对于共生体分离和培养研究, 为科学家对于地衣共生关系本质探讨提供了迷人前景。 该研究中心问题是地衣光合共生物和地衣共生菌培养, 这也是处理地衣生理、 形态、 发育和分子生物学等方面研究根本问题。
地衣共生体培养曾经被认为难以进行, 这关键是因为这是一项很耗时工作, 而且共生体培养是否成功需要长久技术探索。 然而, Ahmadjian（1967b）突破性研究引发了很多地衣学者对共生菌藻培养爱好。 在过去二三十年间, 相关地衣共生菌藻研究和地衣人工重建已取得了相当成就, 图一所表示, 地衣共生菌藻培养能够经过多种不一样方法而实现。
地衣共生体培养极难, 即使用具富营养培养基。 关键是因为共生菌生长远远快于共生藻或蓝细菌。 另外, 霉菌、 酵母菌和细菌等污染也是很关键原因。 所以在全部操作过程中要进行无菌操作以防污染。
本章目标在于讲述从地衣中分离出共生菌藻并进行培养方案。 子方案I讲述了地衣共生菌培养多种方法。 子方案II讲述了地衣共生藻培养多种技术。 这些培养技术已经有报道, 但我们在此研究基础上又添加了部分新内容。
相关共生体分离技术已经有Ahmadjian（1967a,b）和Galum（1988）全方面描述了。
子方案I 共生菌培养
注意: 除了每一个清洗步骤, 全部操作全部应在超净工作台上或无菌条件下进行。 全部仪器在用之前全部应高压灭菌（15~20分钟, 121℃, 1 atm）或干热灭菌（30分钟, 180℃）。
一、 仪器和材料
仪器: 显微镜、 解剖镜、 相差显微镜、 高压灭菌锅、 培养箱、 超声波发生机、 离心机、 超净工作台或无菌工作室。
真菌起源: 我们提议所用地衣应为野外新采集而且在一周内利用。 然而地衣也能够在干燥状态下保留几周, 或在冰箱内存放几年（Yoshimura et al. 1990)。 共生菌能够从子囊孢子、 分生孢子、 裂芽、 粉芽和菌体碎片中分离出来（Ahmadjian 1993）。
用来试验室培养最常见共生菌分离方法是: 孢子释放法, 关键是子囊孢子。 取得共生菌藻另一个方法是解剖菌体切片, 这么会形成大量较纯共生菌, 在第二章我们将具体介绍从菌体碎片中取得共生菌和藻方法。
保留在Akita profectue University和Kochigakuen college培养真菌可见表1。
（P7－13）。
真菌培养基:
Ahmadjian（1993）和Pyatt（1973）提议用来孢子搜集和萌发培养基应含营养量低。 可在15℃黑暗条件下, 采取含水4%琼脂培养基以取得了很好效果。 这类共生菌培养基以下:
WA4培养基——含4%蒸馏水琼脂培养基
琼脂 4克 蒸馏水补足100ml
MY培养基——麦芽酵母提取物培养基（ahmadjian 1967 a）
麦芽提取物 20克 酵母提取物 2克
琼脂 20克 蒸馏水 蒸馏水补足1000ml
LB培养基——Lilly and Barnett’ s培养基（Lilly和Barnett 1951）
葡萄糖 天冬酰胺酸（Asparagine)
KH2PO4 MgSO4•7H2O
Fe（NO3)3•9H2O mg ZnSO4•7H2O
MnSO44H2O 维生素B1（Thiamine)
维生素H（Biotin) 5ug 蒸馏水补足 100ml
能够在以上组分上加入15~20g琼脂, 并补足 1000ml, 并制成固体培养基。
LBG 培养基——Lilly and Barnett’s Gelrite 培养基
LB培养基中以1%w/v Gelrite 替换琼脂。
注意: 在利用和倒入皮氏培养皿（5mm）或试管（5ml）之前, 应将全部培养基进行灭菌。
二、 试验步骤
（一）经过