广州管圆线虫病防治的相关基础研究及钩端螺旋体病DNA疫苗的研究.pdf

中山大学
博士学位论文
广州管圆线虫病防治的相关基础研究及钩端螺旋体病DNA疫苗的
研究
姓名:何汉江
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:吴忠道
20090601
广州管圆线虫病防治的相关基础研究及钩端螺旋体病呙缪芯摘要第一部分广州管圆线虫病防治的相关基础研究专业:病原生物学博士生:何汉江指导教师:吴忠道教授广州管圆线虫病是一种自然疫源性疾病,其病原体为广州管圆线虫,,该病已被卫生部列为新发传染病之~。人为该虫的非适宜宿主,常因生食、半生食含有诨钣壮娴牡螺肉而感染。幼虫侵入人体后主要移行到中枢神经系统,引起以嗜酸粒细胞浸润为主的中枢神经系统炎症反应,造成对神经元的损伤,其病变多累及大脑、小脑、脑干、脊髓等,脑脊液中嗜酸粒细胞增高明显,故称为嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎。感染严重时致患者死亡或留下后遗症。我国台湾、广东、广西、云南、福建、浙江、海南、湖南及江西先后报道发现该病的自然疫源地。近年来,浙江、福建、云南及北京先后出现该病的群体爆发事件。广州管圆线虫病的扩散与流行是我国公共卫生面临的新问题。由于中间宿主福寿螺及褐云玛瑙螺的大量养殖与食用,加上气候变暖,导致该病的向北扩散,防治难度加大。该病发生与饮食习惯有关,常发生爆发事件,且感染后主要造成中枢神经系统的损伤,危害严重。目前对该病的研究尚不系统和深入,为此有必要进一步加强相关基础研究工作,为关键防治技术的研制应用提供理论支撑和新思路。中山大学博士学位论文广州管圆线虫病防治的相关基础研究及钩端螺旋体病呙绲难芯
第鹿阒莨茉蚕叱娴纳镅匦匝芯研究方法嗜酸粒细胞存在活化现象,但缺乏其存在活化现象的直接证据一活性产物的检测。研究目的自陈心陶教授于年发现广州管圆线虫后,相关基础研究仍较薄弱。例如尚未见到广州管圆线虫种群研究或者遗传多态性的报道,无法深入了解其种群的遗传变异信息及其生物学特性。脑脊液中嗜酸粒细胞增高是该病的特征。已有研究提示的致病因素。嗜酸粒细胞活化因子除鸭ǖ乐猓渌罨蜃癓体杀死后其虫体组分在脑部引起的超敏反应是广州管圆线虫病治疗过程中需要解决的问题,目前有采用抗寄生虫药物与激素类药物联合用药的方案,但激素类药物存在许多副作用辗⒕裆窬⒆,寻找替代药物是目前的研究热点。本课题在国家“毕钅炕鸬淖手拢U沽斯阒莨茉蚕叱嬉糯ǘ嗵约捌涠圆煌拗鞯囊赘性研究,感染小鼠嗜酸粒细胞活化相关因子的检测,/∈蠛屠ッ餍∈蟮毒力,为建立实验室广州管圆线虫生态系统和实验动物模型提供依据。染鼠类后收集虫体或直接从家鼠中分离成虫。采用┰鯟及的危寺『蟛庑颍蛄卸云敕治觥⒐菇ㄒ糯鳎⒔,产物通过琼脂糖电泳直接进行分析不同地区来源的广州管圆线虫是否存在基嗜酸粒细胞活性产物女具有较强的细胞毒性,嗜酸粒细胞活性产物可能为该病尚未见报道。癓币彩侵匾5难字⒁蜃印R虼擞斜匾=徊娇U故人崃细胞活性产物及活化因子的研究,有助于迸一步了解该病的发病机制。如何预防虫圆线虫病治疗效果的实验研究。的多态性,了解广州管圆线虫的遗传多态性。比较广州管圆线虫广州株在中间宿主从海口、南宁、广卅⒏V菁拔轮莶杉衷坡觇莼蚋J俾荩又蟹掷胗壮娓中山大学博士学位论文广州管圆线虫病防治的相关基础研究及钩端螺旋体病呙绲难芯Ⅱ
结果与分析结论数、脑脊液总蛋白含量、体重减轻及脑组织病变程度均无显著差异。因多态性。同时,连续分别用感染大鼠的粪便喂食实验室传代的福寿螺和褐云玛瑙螺,鲈潞蠼馄矢腥韭荩鄄炻萏迥诠阒莨茉蚕叱嬗壮娴姆⒂俺媸淮雍衷坡瑙螺和福寿螺分离广州管圆线虫Ⅲ期幼虫分别感染昆明鼠;而感染/小鼠的谟壮胬醋杂诤衷坡觇荨Mü鄄旄腥拘∈蟮乃劳雎省⑻、脑组织的病理变化、脑内虫体数及脑脊液总蛋白含量等指标评价不同宿主来源幼虫的致病力。。广州、南宁及福州来源的虫株序列一致。温州虫株与前三者相差黾基,遗传距离为。,遗传距离为及。中国大陆虫株与日本虫株相比相差个碱基,遗传距离最远。用系统发育的方法分析可将其分为В汗阒荨⒛夏案V堇丛吹某嬷晡支,海口来源虫株为В温州来源的虫株为В坡杀龀嬷晡支,日本虫株为А9阒荨⒛夏案V虫株蛄幸恢拢轮莩嬷暧牒?诔嬷晗允境霾钜欤阒葜暧胛轮葜甑囊糯ň嗬为,广州株与海口株的遗传距离为,温州株与海口株的遗传距离为S孟低撤⒂姆椒ǚ治鯟序列,可将其分为В汗阒荨⒛夏福州的虫株为В?诔嬷昙拔轮莩嬷旮魑支。甀拇涂煞治种,与种б恢隆S壮嬖诤衷坡觇菁案J俾葜械姆⒂尴灾圆钜欤ê衷坡觇螺感染的幼虫数量高于福寿螺。/∈、脑内虫