凋亡和坏死细胞对脓毒症的影响及其机制的研究.pdf

凋亡和坏死细胞对脓毒症的影响及其机制的研究课题来源:广东省自然科学基金国家自然科学基金年广州专名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员免疫学张婕孙尔维教授姜勇教授郑利民教授范杰教授吴长有教授王长希教授陈政良教授马骊教授论文评阅人曾耀英教授业南方医科大学级硕士学位论文
及其机制的研究症的影响硕士研究生沛指导教师:孙尔维教授摘要研究背景脓毒症是许多疾病的共同病理生理过程,是指感染引起的全身炎症反应综合征,浔局适谴量细胞因子和炎症介质释放导致的宿主自身免疫性损伤EФ局⒎⒉≡蚨嘌⒉』砀丛樱劳雎式细摺P矶嘌芯勘砻髌发病早期即已发生多个器官的组织损伤,进一步发展可引起严重脓毒症⑴Ф拘孕菘、多器官功能障碍综合征,踔了劳觥>」芙┠昀炊耘Ф局⒔辛舜罅垦究,对其认识也逐步加深,但其发病率、死亡率仍然居高不下,成为胁∪死亡的首位疾病,且住院时间长、治疗花费巨大。在美国,估计每年有万人死于脓毒症,而在我国目前尚无这方面的统计数字。脓毒症的发病机制十分复杂,其病理生理过程主要包括:细胞因子风暴、炎症介质瀑布、肠道细菌移位和肠源性内毒素血症、凝血系统和炎症系统的交互作用、以及微循环和线粒体功能障碍等。尤其是脓毒症病程晚期,多种发病机制混杂交错、相互作用,机体的病理生理变化更为复杂,也使其治疗更成为难点。迄今为止,对于脓毒症的治疗尚无特效的方法。许多研究表明,脓毒症的早期治疗十分重要,及时合理地进行早期达标治疗瓻,可以显著改善组
摘要织缺氧并预防休克、的发生,降低脓毒症患者的死亡率。因此,深入探讨脓毒症,尤其是早期脓毒症的发病机制、寻求更有力的干预途径,具有十分重要的意义。对于生物有机体,细胞死亡是非常重要的,它既是维持“内环境稳定重要途径,又在疾病的发病机制中起重要作用。细胞死亡主要有两种方式:凋亡和坏死。细胞凋亡是一种主动、程序化和耗能的死亡方式,主要功能是清除衰老、病变或过时的细胞。细胞凋亡的特点是:核固缩、位⑾赴皱缩、凋亡小体形成以及磷脂酰丝氨酸的外翻等。在体内凋亡细胞很快被清除,因而其内容物不会释放到周围组织中。而坏死是霰欢⒎浅绦蚧途哂衅坏性的细胞死亡方式,其特点是细胞能量代谢的突然终止、细胞肿胀、包膜破裂以及细胞内容物释放到周围组织中去。研究发现:凋亡和坏死这两种死亡方式对炎症和免疫系统的后继作用存在着明显差异,凋亡细胞更倾向于抑制炎症反应,促进的生成,下调免疫反应,促进机体对移植物的耐受等,而坏死细胞则倾向于促炎反应,增强排斥反应以及自身免疫等。脓毒症可以促进机体淋巴细胞和肠道内皮细胞的广泛凋亡,这在对脓毒症患者的尸体解剖中已经得到证实,而非脓毒症死亡患者尸体解剖未发现明显的淋巴细胞和肠道内皮细胞凋亡。孙尔维等研究发现给受者大鼠预先输注供者凋亡脾细胞可以明显延长心脏移植物的存活,而输注同种活细胞或坏死细胞则无此效应。现已证实,巨噬细胞吞噬凋亡细胞之后可以分泌.,畃等负性调节因子。这提示凋亡细胞在脓毒症免疫抑制中可能发挥作用。有文献报道:给脓毒症小鼠注射凋亡细胞会加速脓毒症小鼠的死亡,降低存活率,而注射坏死细胞则可以提高脓毒症小鼠的存活率。人们亦发现中性粒细胞吞噬细菌后出现的凋亡可以促进细胞的生成,而自发性凋亡细胞则促进细胞的生成。在脓毒症的发生发展过程中有大量中性粒细胞凋亡,这可能会改变细胞的组成比例。此外,在给脓毒症小鼠输注凋亡细胞后体内生成增加,输注坏死细胞后体内甕生成增加。另外,给脓毒症小鼠输注凋Ⅱ
一、小鼠与/∈笈Ф局⒛P偷慕⒓捌浞从π圆异的分析亡抑制剂也可以明显提高脓毒症小鼠的存活率,在输注后早期分泌增多,,但尚有很多未解决的问题,例如:在脓毒症早期这一治疗的最佳和关键时期内,器官的结构和功能是否受到损伤、损伤程度和性质如何洳±砩砑肮δ芊⑸裁幢浠其损伤程度与脏器功能障碍有何关系渌鹕斯媛珊突迫绾如何对其损伤进行早期干预、防止脓毒症的进展和的发生狙芯康哪康氖腔谏鲜龆耘Ф局⒌娜鲜逗蜕写决的问题,通过实验研究探讨凋亡细胞和坏死细胞对脓毒症的影响及其机制,从而为今后治疗方法的探索提供新的方向,为早期干预方法的研究提供实验参考。目的:建立小鼠脓毒症模型,分析与/狡废敌∈蠖耘Ф症反应的差异性,从而为本实验选择合适的用于脓毒症模型的小鼠。方法:甋级小鼠只,禕痗小鼠只,进行随机分组,分组情况具体如下:糜谏媛史治龅墓唬篊/组唬珺痗糜谙赴蜃蛹觳獾墓唬篊/组唬珻/组唬珺痗只。妹こ嵩┛追建立小鼠脓毒症模型。组常规消毒腹部,皮肤正中切开,打开腹腔寻找盲肠,找到盲肠后不进行盲肠结扎、穿孔,将其放回腹腔,然后关闭腹腔,逐层缝合;槌9嫦靖共浚し粽星锌#蚩腹腔寻找盲肠,小心分离其远端与结肠的系膜,避免碰伤肠系膜血管。盲肠内如有粪便,则轻轻将其挤向与其相连的结肠,在盲肠远端处用无菌潘肯呓艚结扎,并用无菌