人环磷酸鸟苷cgmp酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书.pdf

人环磷酸鸟苷( cGMP )酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA 法定量测定人组织匀浆或其它相关生物液体中 cGMP 含量。实验原理用纯化的 cGMP 抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的 cGMP 抗体 HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物( TMB )显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 cGMP 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( 值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制 1 、酶标板:一块( 96 孔) 2 、标准品(冻干品): 2 瓶,请临用前 15 分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 1ml ,盖好后室温静置大约 10 分钟,同时反复颠倒/ 搓动以助溶解,其浓度为 20 ng/ml ,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成 20 ng/ml 10 ng/ml 5 ng/ml ng/ml ng/ml ng/ ml ng/ml ,样品稀释液直接作为空白孔 0 ng/ml 。如配制 10 ng/ml 标准品:取 (不要少于 ) 2 0 ng/ml 的上述标准品加入含有 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3 、样品稀释液: 1 × 20ml 。 4 、检测稀释液 A : 1 × 10ml 。 5 、检测稀释液 B : 1 × 10ml 。 6 、检测溶液 A : 1 × 120 / 瓶( 1:100 )。临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释(如: 10 检测溶液 A / 99 0 检测稀释液 A ),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制( 100 / 孔),实际配制时应多配制 - 。 7 、检测溶液 B : 1 × 120 / 瓶( 1:100 )。临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶液 A 。 8 、底物溶液: 1 × 10ml/ 瓶。 9 、浓洗涤液: 1 × 30ml/ 瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10 、终止液: 1 × 10ml/ 瓶( 2 mol/L H2SO4 )。 11 、覆膜: 5 张 12 、使用说明书: 1 份自备物品 1 、酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 2 、微量加液器及吸头, EP 管 3 、蒸馏水或去离子水,滤纸标本的采集及保存 1 、组织匀浆:将动物的组织标本先用 PBS 洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在 5~10 ml PBS 中于-20 ℃放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物 5000x g 离心 5 分钟,取上清即可检测。 2 、其它生物标本:请 1000 g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 或-80 保存,但应避免反复冻融。注:以上标本均应密封保存, 4 保存应小于 1 周, -20 不应超过 1 个月, -80 不应超过 2 个月; 操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在 37 溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓