蜡梅expansin基因CpEXP2功能初步分析.pdf

西南大学硕士学位论文蜡梅expansin基因CpEXP2功能初步分析姓名:茅允彬申请学位级别:硕士专业:园林植物与观赏园艺指导教师:李名扬 20090501 摘要蜡梅expansin基因CpEXP2功能初步分析园林植物与观赏园艺专业硕士研究生茅允彬指导教师李名扬教授摘要 Expansin基因家族是一类巨大的基因家族,主要分为Q-expansin与13-expansin两类,分别都具有很多的基因成员,广泛的存在于多种植物中,目前已有大量的expansin基因被克隆。其所编码的扩张蛋白属于细胞壁酶蛋白,在植物体中表达具有高度的专一性,其表达调控受到植物体自身发育进程、外源激素以及环境因子的调控。研究表明,Expansin基因对植物种子萌发、根系生长、茎、叶片生长发育、果实成熟软化、器官脱落等等方面都起着重要作用,几乎参与了整个植物生长发育过程。本研究在本实验室原有研究基础上,在蜡梅中克隆到了另外一个cxpansin基因,命名为CpEXP2。构建了植物表达载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,获得了Tl代转基因植株:构建了原核表达载体, 在大肠杆菌中表达了CpEXP2。主要研究结果如下: ,获得了大小为1115bp的eDNA序列,序列分析表明,该基因包含一个771bp的ORF框,编码蛋白长257个氨基酸. BLASTX比对结果显示,与a-expansin 的同源性更高,初步推定所获得的eDNA编码Expansin扩展蛋白。命名CpEXP2。 CpEXP2基因位于文库克隆载体pTriplEx2上,活化菌液并用限制性内切酶SfiI酶切,,回收目的片段和载体并连接,经过酶切和PCR验证,成功构建了克隆载体:再用XbaI和Smal分别双酶切克隆载体和表达载体pC2301,回收目的片段和表达载体并连接,经酶切和PCR验证,成功构建了含有目的基因的表达载体。 ,经过Kill+抗性筛选检测,PCR检测,证明CpEXP2基因已经初步整合入拟南芥基因组中,且T1代转基因植株生长正常。 I和Hind III酶切位点的引物。PCR扩增蜡梅CpEXP2基因,用BamH I和Hind 111 分别双酶切蜡梅CpEXP2基冈和原核表达载体PET-28a,然后将蜡梅CpEXP2基因连接剑原核表达载体PET-28a上,经过酶切与PCR验证,表明已经成功构建了含有目的基因的原核表达载体。两南人学硕十学位论文 ,通过合适的诱导条件, BL21中表达,并通过SDS—PAGE检测重组蛋白证明了Cp￡Xp2基因的表达。关键词:expansin克隆表达载体原核表达 ABSTRACT Functional Characterization ofgeneCpEXP2 Candidate Mao Yunbin Supervisor LiMingyang ABSTRACT Expansin gene family akind of ahuge gene ismainly divided intoQ—expansin and lB-expansin two categories,both of which have a posesses theexistence of abroad variety large number ofexpansin genes have been cloned expansin encoding protein belongs tOthe cellwallzymoprotein,expressed intheplant with ahiIgh degree expression and regulation was controlled bytheplant'sOWIldevelopment process,aS well弱exogenous honnone、弦gulation and control shows that,Expansin gene play all important roleinplant seedgermination,root growth,stem,le