实验四new、细胞培养用液的配制.ppt

实验四 、细胞培养使用液的配制
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细胞生物学实验 张伟
一、实验原理：细胞培养的营养条件
体外培养细胞所需营养物质与体内基本相同，但需求的量与代谢方式与体内细胞不尽相同
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细胞生物学实验 张伟
1. 细胞培养所需基本物质
（1）水
（2） 无机盐
（3） 糖类
（4） 氨基酸
（5） 维生素
（6） 促生长因子
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细胞生物学实验 张伟
糖类---葡萄糖
细胞的主要营养物质，为生命活动提供能量。
与蛋白质和脂类共同构成结构材料和生物活性物质。
体外培养动物细胞时，常以葡萄糖作为能源材料，根据不同细胞的代谢特点，所加葡萄糖浓度有所不同。
植物细胞培养一般以蔗糖作为能源物质。
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细胞生物学实验 张伟
氨基酸
常需要以下12种氨基酸：精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和缬氨酸
另外所有细胞都需要谷氨酰胺，其具有特殊作用—促进氨基酸进入细胞膜，参与核酸合成，也是能源和碳源。
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细胞生物学实验 张伟
2. 培养用液
培养用液包括：培养液（基）、缓冲液、平衡盐溶液、血清及消化液、pH调节液和抗生素等。

（1）水与平衡盐溶液
体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高。。
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细胞生物学实验 张伟
常用的平衡盐溶液有Hanks BSS，Earle BSS等
注意：一些BSS含有Ca2+、Mg 2+ ，它们是细胞膜的重要组成成分，又参与许多细胞功能活动，但它们有使细胞凝集的作用，在配制分散细胞的消化液和特殊用途的细胞洗涤时，宜采用无Ca2+、Mg 2+ 的D-Hanks 液或PBS。
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细胞生物学实验 张伟
（2）培养基
培养基是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。
天然培养基
常用的天然培养基有血清、血浆、水解乳蛋白和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）、鼠尾胶原等。
优点： 营养成分丰富，培养效果好
缺点： 来源受限。
成分复杂。
易发生支原体污染
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细胞生物学实验 张伟
血浆:鸡血浆的使用较早，含有多种化学物质，其中包括：水(91%)、蛋白质(7%)、脂质(1%)、糖类(%)、无机盐类(%)、代谢产物：尿素、肌酐、尿酸等。血浆蛋白有白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原三类。当与鸡胚胎汁混合后发生凝固，构成细胞生长的环境，有利于细胞向三维空间生长。缺点；易于液化。
鸡胚浸出液：含有生长因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等，有刺激细胞生长作用，为早年培养使用的培养用液，现已被合成培养液所代替。
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细胞生物学实验 张伟
水解乳蛋白：乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，含有丰富的氨基酸。
胶原：细胞生长的良好基质，利于细胞附着，改善细胞表面性质，利于细胞生长。
血清：天然培养基中最重为重要和组织培养中最常使用的天然培养基。含有多种不可缺少的能维持细胞生长增值的成分。
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细胞生物学实验 张伟