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实验九 大蒜细胞SOD的提取和分离
一、实验目的
通过大蒜细胞SOD的提取与分离，学习和掌握蛋白质和酶的提取与
分离的基本原理和操作方法。
二、实验原理
超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消
炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子（O2-）进行歧化反应，生成氧
和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通
过组织或细胞破碎后，。由于SOD不溶于
丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。
植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质
含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指
标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明，植物在逆境
胁迫或衰老过程中，细胞内自由基代谢平衡被破坏而有利于自由基的产
生。过剩自由基的毒害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜
系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。自由基是具有未配对价电子
的原子或原子团。生物体内产生的自由基主要有超氧自由基（O2.－）、
羟自由基（OH.）、过氧自由基（ROD）、烷氧自由基（RO）等。植物
细胞膜有酶促和非酶促两类过氧化物防御系统，超氧化物歧化酶
（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧
化物酶（ASA-POD）等是酶促防御系统的重要保护酶。抗坏血酸
（VC）、VE 和还原型谷胱甘肽（GSH）等是非酶促防御系统中的重要
2.－
抗氧化剂。SOD、CAT 等活性氧清除剂的含量水平和O 、H2O2、OH.
和O2 等活性氧的含量水平可作为植物衰老的生理生化指标。
SOD 是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SOD：Mn－
SOD －SOD，它们可催化下列反应：
2.－ 2.－
O ＋ O ＋ 2H＋SOD → H2O2＋O2
H2O2＋CAT → H2O ＋ 1/2O2
由于超氧自由基（O2.－）为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD
活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定SOD 的活力。邻苯
三酚在碱性条件下可迅速自氧化,释放出O2-,生成带色的中间产物，在
420nm有最大吸收峰。邻苯三酚自氧化产生的中间产物在40s-3min这段
时间，生成物与时间有较好的线性关系。
颜色深→SOD逐渐增多→颜色浅，即酶活力越大，颜色越浅。
三、实验仪器、材料与试剂
1、仪器
恒温水浴锅、冷冻高速离心机、可见分光光度计、玻璃研钵、玻
棒、烧杯、量筒、精密pH试纸
2、材料和试剂
（1）新鲜蒜瓣
（2） A液：，(Tris)-盐酸缓冲溶液 (内
含1mmol/EDTA-2Na)。 g mg ml