放射线诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体内实验研究.pdf

放射线诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体内实验研究博士生姓名:王丽学院号:校:复旦大学系:复旦大学肿瘤医院业:肿瘤学指导老师:冯炎教授指导小组:付小龙年专本研究为国家自然科学基金资助项目
缩略简称英文缩写英文名称中文名称转化生长因子早期生长反应因子重组腺病毒放射性肺炎放射性肺纤维化结缔组织生长因子肿瘤生长延迟时间蛋白免疫印迹实验噶用庖呶讲舛曲拉通一光密度.—复旦大学博士研究生毕业论文缩略词狟一
放射线诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体内实验研究中文摘要日的放射性肺纤维化是胸部肿瘤病人放射治疗后常见的并发症,至今仍缺乏理想的治疗手段。随着对放射性肺纤维化发病机制的深入研究,以及分子生物学的快速发展,基因治疗有望成为新的治疗肺纤维化的有效手段。目前认为,放射性肺纤维化是多种细胞因子参与的,多细胞多系统的作用结果,其中转化生长因子琓—是目前公认的最重要的细胞因子之一。荰—赴谛藕糯ǖ嫉淖枰忠蜃印R延惺笛橹っ魍庠葱許基因阻断藕糯ǖ纪罚芄幻飨砸种撇├趁顾厮碌姆蜗宋5牵诨体内瓸广泛存在,生理作用多样而复杂,如果广泛阻断其信号传导通路,可能会产生一系列的病理生理变化,对机体造成不良影响。因此如何靶向性阻断狟的信号传导通路是基因治疗肺纤维化能否应用于临床的关键因素。早期生长反应因子一瓻且恢志哂蟹溆盏蓟因表达特性的基因启动子。利用恼庖惶匦裕裟芙獷的基因启动子与康幕蛞黄鹫系较俨《驹靥逯校腥拘∈螅派湎哒丈浜螅活基因启动子,使其在放射区域内调控下游虻母弑泶铮蛐阻断淖饔猛罚赡芏苑派湫苑蜗宋邢蛐曰蛑瘟频淖饔谩这方面的研究,国内外尚未见报道。本研究将放射性敏感性元件蚱舳韬湍康幕騍串联整合到腺病毒载体内,构建成重组腺病毒瓻貉≡馛小鼠为研究对象,经由气管内给药后制备放射性肺纤维化模型,研究外源性基因放射区域内靶向性阻断狟信号传导通路,从而定向基因治疗放射性肺纤维化的机制及疗效,并从重组腺病毒对肿瘤的生物学行为影响的角度,探讨其安全性。本研究系临床前的动物实验研究,为未来开发临床上放射性肺纤维化的新的治疗手段提供理论依据。研究∈蠖云苣谕揪陡鳤瓻—哪褪苄裕禾教滞庠葱复旦大学博士研究生毕业论文
材料与方法蛟诜巫橹赴诒泶锏亩ㄎ唬泶镉敕派浼亮俊⒎派浜笫毕嗉爸刈橄病毒滴度的关系;;∈伟┥ぜ胺⑸巫R频那痹谖O招裕范ㄖ刈橄俨《径ㄏ蚧蛑瘟品派性肺纤维化的安全性。将蚱舳拥姆派涿舾性<湍康幕騍包装到复制缺陷型腺病毒内,∈螅婊肿椤F苣诟∈焙螅詙射线全胸腔放射。小鼠气管内给不同滴度的重组腺病毒,通过观察急性反应及死亡情况来确定小鼠对重组腺病毒的安全耐受滴度范围:通过免疫组织化学方法,研究辐射诱导后外源性蚍巫橹赴诒泶锏亩ㄎ弧2捎肳印迹法检测不同放射剂量、放射后不同时间及不同重组腺病毒滴度时小鼠肺组织外源性鞍椎表达,探讨辐射诱导后其表达与放射剂量、放射后时相间及重组腺病毒滴度的关系。于放射后不同时间,用ḿ觳夥巫橹赥—、、图癐型胶原含量;比色法测定羟脯氨酸含量;光镜下病理组织学观察肺泡炎及肺纤维化程度,。┖闪鲂∈竽P椭琢錾で摺肿瘤生长延迟时间、小鼠生存时间及肺部转移发生情况的影响,⑸巫R频那痹谖O招裕っ髦刈橄病毒定向基因治疗放射性肺纤维化的安全性。甕射线照射可明显诱导蚱舳拥骺叵俨《窘榈嫉腟基因在∈蠓文诒泶,《镜味仍及以下时,小鼠可安全耐受,各组小鼠均存活,而重组腺病毒滴度在及以上时,每组恍∈笾杏只以上死亡。免疫组织化学检测结果显示外源性蛟诜闻萆掀は赴⒀9苣谄は赴跋钢苌掀は赴诰忻结果复旦大学博士研究生毕业论文中文摘要
伟┲琢錾ぜ胺⑸巫R频奈O招裕⑶矣醒映ぶ琢錾ぱ映偈奔浼吧存时间的作用。从对肿瘤的生物学行为影响方面来说,重组腺病毒用于阻断显表达,而各对照组未见表达。庠葱許基因表达随重组腺病毒滴度升高而增加,,时下降;放射后∈逼浔泶锪孔罡撸而后降低,小时降至接近正常水平,统计学检验显示差异有显著统计学意义..湎哒丈浜—埽庠葱許基因有降低小鼠肺组织内、Ⅲ型胶原及羟脯氨酸含量的作用,,外源性蚪档土诵∈蠓巫橹肺纤维化程度。畒射线照射后,外源性蛴醒映ば∈驦肺癌肿瘤生长延迟时间及小鼠生存时间的作用琢錾ぱ映偈奔銻,琍.;.;空白组与组比较琍.。肿瘤体积生长至放射前妒盇瓻组与空白组比较琍.;《疚T靥澹溆盏糆启动子能够调控外源性蛟小鼠肺组织各种细胞胞浆内广泛表达