血清清球蛋白分离新.ppt

血清清球蛋白分离新
第一页，共27页
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内 容
实验目的
1
实验原理
2
实验材料
3
实验过程
4
5
注意事项
第二页，共27页
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实验目的
掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法
了解柱层析技术
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实验分组
四个人一小组
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实验过程
盐析（粗分离）
葡聚糖凝胶层析（脱盐）
DEAE纤维素离子交换层析（纯化）
醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）
第五页，共27页
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实验材料
人混合血清
葡聚糖凝胶（G-25)层析柱
DEAE纤维离子交换层析柱
饱和硫酸铵溶液
醋酸铵缓冲溶液
20%磺基水杨酸
1%BaCl2溶液
氨基黑染色液
漂洗液

电泳仪、电泳槽
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实验原理
蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。
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蛋白质的理化性质与常用的分离纯化方法
蛋白质的理化性质
常用的纯化方法
分子质量
透析、超滤
凝胶层析★
离心
溶解度
调整pH
调整离子强度★
降低介电常数
电荷
电泳★
等电聚焦
离子交换层析★
特异结合部位
亲和层析
其他性质
吸附层析
液相层析
气相层析
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球 蛋 白
1
2


等电点




~
相对分子量（×104）

20
30
9~15
~30
含量（％）
57~67
2~5
4~9
~12
12~20
血清蛋白的等电点、平均分子量及正常含量
清蛋白 A
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1. 粗提（盐析法）
由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样。
调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。
血清清蛋白
球蛋白
半饱和硫酸铵
清蛋白不沉淀，上清
球蛋白沉淀，蒸馏水溶解
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