2013年秋季学期
生物化学与分子生物学实验教学中心
血清清蛋白、g-球蛋白的分离、提纯与鉴定
2
内容
实验目的
1
实验原理
2
实验材料
3
实验过程
4
5
注意事项
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实验目的
掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法
了解柱层析技术
实验分组
四个人一小组
5
实验过程
盐析(粗分离)
葡聚糖凝胶层析(脱盐)
DEAE纤维素离子交换层析(纯化)
醋酸纤维素薄膜电泳(纯度鉴定)
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实验材料
人混合血清
葡聚糖凝胶(G-25)层析柱
DEAE纤维离子交换层析柱
饱和硫酸铵溶液
醋酸铵缓冲溶液
20%磺基水杨酸
1%BaCl2溶液
氨基黑染色液
漂洗液
电泳仪、电泳槽
7
实验原理
蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别,可分离纯化各种蛋白质。
8
蛋白质的理化性质与常用的分离纯化方法
9
血清蛋白的等电点、平均分子量及正常含量
清蛋白 A
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1. 粗提(盐析法)
由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样。
调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。
血清清蛋白
球蛋白
半饱和硫酸铵
清蛋白不沉淀,上清
球蛋白沉淀,蒸馏水溶解
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