《生物化学实验手册簿》.doc

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生物化学实验手册
学时：36 学分：
课程属性：专业必修课 开课单位：华侨大学生物医学学院
先修课程：高等数学、普通物理学、无机与分析化学、有机化学
一、课程的性质与任务
生物化学实验课是在学习生物化学理论课的根底上进展的一个实践性环节，本课程的教学任务是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象，与综合运用已学过的理论知识设计实验或进展综合性的实验，巩固和加深对生物化学课程中根本理论知识的理解，训练学生理论知识的运用能力、实验操作技能、实验数据的处理和分析能力。
二、实验目的与根本要求
本实验课配合理论教学，通过实验从实践中进一步学习，掌握和运用学过的根本理论；运用生物化学理论分析实验过程中的各种现象和问题，培养、训练学生的分析和解决问题的能力。
学生必须完成的根本要求：预录表格；测取实验数据；整理实验数据；写出实验报告。
三、实验项目一览表
生物化学实验项目一览表
序号
实验项目名称
实验类型
实验要求
适用专业
学时
1
2
3
4
5
6
7
氨基酸的别离鉴定—纸层析法
紫外分光光度法测定蛋白质的含量
Bradford法测定蛋白质的含量
Folin-酚法测定蛋白质的含量
垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳别离蛋白质
脲酶的动力学研究
用正交法测定几种因素对酶活性的影响
根底性
根底性
根底性
根底性
综合性
根底性
根底性
必做
必做
必做
必做
必做
必做
必做
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
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2
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DNA的提取与测定
琼脂糖凝胶电泳实验
复原糖和总糖的测定
可溶性糖的硅胶G薄层层析
维生素C含量的定量测定
卵磷脂的提取、纯化和鉴定
综合性
综合性
根底性
根底性
根底性
设计性
必做
必做
必做
必做
必做
必做
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
生物医学类
3
3
3
3
2
3
四、实验考核方式与方法
考核方式：考查和实验成绩。 实验考查成绩占总成绩的30%。 实验成绩占总成绩的70%。实验成绩评分方法：实验操作占40%，实验态度占20%，实验报告占40%。
五、实验项目的具体内容。
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实验一：氨基酸的别离鉴定—纸层析法
一、实验目的
通过对氨基酸的别离，学习运用纸层析法别离氨基酸混合物的根本原理，掌握纸层析的操作方法。
二、实验原理
纸层析〔Paper Chromatography，简称PC〕，是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上有亲水性的羟基，通过吸附一层水作为固定相，通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动称为下行层析，自下而上流动称为上行层析。流动相流经支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到别离。物质被别离后在纸层析图谱上的位置用Rf值〔比移值〕来表示：
Rf值 = 原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿的距离
在一定条件下某种物质的Rf值是常数，其大小受物质的结构、性质、溶剂系统物质组成与比例、pH值、选用滤纸质地和温度等多种因素影响。此外，样品中的盐分、其他杂质以与点样过多均会影响的有效别离。无色物质的纸层析图谱可用光谱法〔紫外光照射〕或显色法鉴定，氨基酸纸层析图谱常用茚三酮或吲哚醌作为显色剂，本实验采用茚三酮作为显色剂。
三、仪器与试剂
〔一〕实验器材
〔1〕层析缸〔2〕微量器枪头〔3〕喷雾器〔4〕培养皿〔5〕电吹风机〔6〕层析滤纸〔7〕直尺
〔二〕实验试剂
〔1〕扩展剂：4份水饱和的正丁醇和1份冰乙酸的混合物。将20毫升正丁醇与5毫升冰乙酸放入分液漏斗中与15毫升水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层，取漏斗内的扩展剂约5毫升置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。
〔2〕氨基酸溶液：2mg/mL的赖氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸溶液以与它们的混合液。
〔3〕显色剂：%水合茚三酮正丁醇溶液。
四、操作步聚
，取长22厘米，宽14厘米的层析滤纸一X，在滤纸的一端距边缘2-3厘米处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2厘米作一