实验四血凝和血凝抑制试验.ppt

实验四血凝和血凝抑制试验
第1页，本讲稿共20页
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料
四、实验步骤
五、结果判定
第2页，本讲稿共20页
了解血凝和血凝抑制试验的原理。
了解血凝价和血凝单位的概念。实验四血凝和血凝抑制试验
第1页，本讲稿共20页
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料
四、实验步骤
五、结果判定
第2页，本讲稿共20页
了解血凝和血凝抑制试验的原理。
了解血凝价和血凝单位的概念。
掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。
一、实验目的
第3页，本讲稿共20页
二、实验原理（一）血凝试验（HA）
一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。
病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。
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HA试验的原理图
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一层RBC均匀铺在孔底者为++++；
基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为+++；
RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为++；
RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+;
RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为±;
红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为-。
++++ +++ ++ + -
血凝试验结果判定
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1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
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（二）血凝抑制试验（HI）
当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。
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HA试验的原理图
第9页，本讲稿共20页
HI试验的原理图
第10页，本讲稿共20页
三、实验材料
鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。
鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。
%生理盐水。
被检血清，采自被检鸡的健康血清。
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四、实验步骤（一）血凝试验（HA）
在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水。
在第1孔中加入50μl病毒抗原，反复吸取混匀后吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl；最后两孔（11、12）为红细胞对照。
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将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。
手工震荡，37℃静置25~30min后观察结果。
病毒液的血凝价是1:2？。
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
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第14页，本讲稿共20页
（二）血凝抑制试验（HI）
在血凝板的1~11孔加入25μl生理盐水，最后一孔（12孔）加50μl。
第1孔加待检血清25μl，混匀后吸25μl至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃25μl。
从1~11孔，每空加稀释好的25μl 4个血凝单位的病毒悬液。37 ℃静置25~30min
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:26
第11、12孔不加
第12孔不加
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血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
1个血凝单位：能使50%的红细胞发生凝集的病毒悬液。
病毒浓度
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C