NBT法测定SOD活力.doc

NBT法测定SOD活力.doc(完好word版)NBT法测定SOD活力
(完好word版)NBT法测定SOD活力
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NBT法测定SOD活力
原理
超氧化物岐化酶（supe(完好word版)NBT法测定SOD活力
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NBT法测定SOD活力
原理
超氧化物岐化酶（superoxidedismutase，SOD）广泛存在于动、植物体内，是一种消除超氧阴离子自由基（O2.-）的酶，它催化以下反响：
2O2.-+2H+→H2O2+O2
反响产物H2O2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
实验中依照超氧化物歧化酶克制氮蓝四唑（NBT）在光下的复原作用来确立
酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光复原，被复原的核黄素在有氧
条件下极易再氧化而产生
.-
.-
O2
，O2可将氮蓝四唑复原为蓝色的甲腙，后者在
560nm处有最大汲取。而
SOD可消除O2
.-，进而克制了甲腙的形成。于是光还
原反响后，反响液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可计算出
酶活性大小。
试剂
50mM，（+）
130mM甲硫氨酸，→10mL，磷酸缓冲液配制
750μMNBT，→10mL，磷酸缓冲液配制
100μMEDTA-Na2，→100mL，磷酸缓冲液配制
20μM核黄素，→100mL，蒸馏水配制，避光保留附录：不一样pH磷酸缓冲液的配制
母液：
A：：
B：：
用蒸馏水溶至500mL
100mM磷酸缓冲液配法：x(mL)A+y(mL)B稀释至200mL
pH











x(mL)A











y(mL)B











实验步骤（1）酶液粗提
称取必定量的实验资料于预冷的研钵中，加入适当磷酸缓冲液，冰浴充足研磨后定容（1mL/）。℃,10000rpm离心15min，上清液即为酶粗提液。（POD，CAT，MDA，可溶性蛋白等的测定均按此方法提取）
2）反响液配制
取透明度好的指形管或离心管，按下表挨次加入各溶液：
试剂（酶液）
用量/μL
终浓度/比色时
50mM磷酸缓冲液
600
130mMMet
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