细胞培养液的配制课件.ppt

关于细胞培养液的配制
现在学习的是第1页，共27页
培养基的选择
依据: 经验、文献、尝试
常用: RPMI1640、DMEM
培养基的来源
市售干粉培养基---自己配制
液体培养基---直接关于细胞培养液的配制
现在学习的是第1页，共27页
培养基的选择
依据: 经验、文献、尝试
常用: RPMI1640、DMEM
培养基的来源
市售干粉培养基---自己配制
液体培养基---直接使用(注意有效期)
现在学习的是第2页，共27页
培养基的除菌方法
过滤除菌: (1) 正压过滤---效率高
(2) 负压过滤---效率低
高压蒸气灭菌:
不含谷氨酰胺，灭菌后另外添加
培养基附加成分的添加
按使用说明或实验要求添加
配制时加: 碳酸氢钠、抗生素、血清等
临用前加: 生物活性因子如EGF、FGF、NGF、PDGF等
现在学习的是第3页，共27页
RPMI1640培养液配制过程
准备物品
(1) 不锈钢过滤器, 滤膜(,),磁力搅拌器,天平,烧杯,量筒,盐水瓶
(2) 培养粉,1N HCl,NaHCO3,青霉素,链霉素,胎牛血清,新鲜三蒸水
消毒物品
, 包装, 高压蒸气消毒
现在学习的是第4页，共27页
配制步骤
(1) , 磁力搅拌20min
(2) 加2g NaHCO3/L, 继续搅拌10min
(3) 加青霉素100U/mL(80万U溶至4ml三蒸水, )
链霉素100U/mL(100万U溶至5ml三蒸水, ))
(4) 加1N HCl约3mL, , 继续搅拌
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(5) 按要求加血清　（血清一般需经56℃，30min灭活）
例如: 10%胎牛血清
无血清培养液 900ml
灭活胎牛血清 100ml
(6) 正压过滤除菌 (气压适当, 防止滤膜破裂)
(7) 分装,贮存于4℃，2周内用完。
(8) 无菌试验: 取样, 37℃放置24－72h, 无细菌、霉菌污染方可使用
现在学习的是第6页，共27页
注意事项
谷氨酰胺在溶液中很不稳定，４℃，７ｄ分解５０％，放置两周以上时，根据需要添加谷氨酰胺。配制１００×母液（200 mmol/L, ）, －2 ml母液，终浓度1－4 mmol/L
抗生素在37℃稳定性维持3－4d, 可控制轻度污染。防污染重在无菌操作
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培养液配制过程 （以RPMI1640为例）
现在学习的是第8页，共27页
1. 物品准备
(1）滤器、 微孔滤膜、磁力搅拌器、天平、烧杯、量筒、pH计、贮液瓶等。
现在学习的是第9页，共27页
(2) 培养粉、 NaHCO3、 1N HCl、青霉素、链霉素、血清、新鲜制备的三蒸水
现在学习的是第10页，共27页
2. 滤器消毒准备
现在学习的是第11页，共27页
，浸入三蒸水中
现在学习的是第12页，共27页
将浸湿后的滤膜光面向上依次置于滤器上
现在学习的是第13页，共27页
将装有滤膜的滤器包装后高压蒸气消毒
现在学习的是第14页，共27页

现在学习的是第15页，共27页
① 将培养粉倒入容器中
现在学习的是第16页，共27页
②加入新鲜制备的三蒸水磁力搅拌器充分搅拌
现在学习的是第17页，共27页
③按照实验的具体要求分别加入 NaHCO3和青链霉素（青霉素100U/mL：80万U溶至4ml三蒸水, ； 链霉素100U/mL：100万U溶至5ml三蒸水, )
现在学习的是第18页，共27页
④按要求加入一定比例的血清（血清一般需经56℃，30min灭活）
例如: 配制含10%胎牛血清的RPMI1640培养液1升，应加入
无血清培养液900ml
灭活胎牛血清100ml
现在学习的是第19页，共27页
⑤加入1N HCl约3mL,－
现在学习的是第20页，共27页
磁力搅拌器充分搅拌
准备过滤
现在学习的是第21页，共27页
⑥ 无菌条件下装好滤器，检查气体以及液体管道是否通畅。 (一般使用氧气。注意气压适当, 防止滤膜破裂，)
现在学习的是第22页，共27页
将液体倒