小麦叶片类囊体膜蛋白复合体的分离和分析技术研究.pdf

生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011 年第 7 期
小麦叶片类囊体膜蛋白复合体的分离和分析技术研究
向小聪1,2 孟庆石2 鲍锦库1 潘映红2
, ,
1 四川大学生命科学学院成都 610065 2 中国农业科学院作物科学研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程北京 100081
摘要膜蛋白复合体在生命活动中执行着重要的生物化学功能,具有重要的研究意义,但由于其低表达和高度疏水
的特点,完整状态和低丰度的膜蛋白复合体的分离分析仍是一大挑战。首先,采用蓝绿温和胶非变性电泳作为第一维分离技
术,大量分离制备叶绿体类囊体膜蛋白复合物其次,采用电洗脱方法差异富集第一维电泳分离到的各种蛋白复合体最后,
采用 SDS-PAGE 作为第二维分离技术,分析差异富集的不同种蛋白复合体的亚基构成。研究结果表明,利用这种分离分析模
式,能有效地富集膜蛋白复合体尤其是低丰度膜蛋白复合体,明显提高第二维分离分析的分辨率和蛋白覆盖率。
关键词蓝绿温和胶电泳类囊体膜蛋白复合体电洗脱 SDS-PAGE 低丰度
Technological Study on Separation and Analysis of Thylakoid
Membrane plexes from Wheat Leaves
,
Xiang Xiaocong1 2 Meng Qingshi2 Bao Jinku1 Pan Yinghong2
1 , , 2 ,
College of Life Science Sichuan University Chengdu 610065 The National Key Facility for Crop Gene Resources and ic Improvement
, ,
Institute of Crop Science Chinese Academy of Agricultural Sciences Beijing 100081
,
Abstract Membrane plexes perform important biochemical function in cellular process but the analysis of membrane
,
plexes is a significant challenge due to their hydrophobic properties and relatively low abundance. In this study blue-native

polyacrylamide gel electrophoresis BN-PAGE was used to separate and prepare a large number of chloroplast thylakoid membrane pro-
,
plexes in the first dimension. Then electroelution was performed to differentially enrich various native plexes separa-