支原体污染检测试剂盒(PCR法).doc

支原体污染检测试剂盒（PCR法）
(PCR Mycoplasma Detection Kit)
Cat number：YS012
Store at -20℃ for one year
Expire date：
For Resear
支原体污染检测试剂盒（PCR法）
(PCR Mycoplasma Detection Kit)
Cat number：YS012
Store at -20℃ for one year
Expire date：
For Research Use Only
一、 试剂盒说明
本试剂盒通过PCR法对细胞培养物、动物分泌物等多种生物材料进行支原体污染检测。常规培养法进行支原体检测一般需要几天的时间，而本试剂盒通过PCR扩增及电泳分析进行支原体检测只需几个小时，方便快捷。本试剂盒的多对引物能特异性扩增多种支原体rRNA基因片段，一次就可以检测至少11种的支原体，包括M. fermentans，M. hyorhinis，M. arginini，M. orale，M. salivarium，M. hominis，M. pulmonis，M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyponeumoniae, M. capricolum 等。其原理是原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列差别很大。这个间隔区的DNA序列及长度在支原体各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大差异的部分。因此可以在编码16S和23S rRNA的DNA上设计一对引物，扩增编码16S和23S rRNA的DNA间隔区，然后在编码16S和23S rRNA的DNA间隔区的保守区上设计一条引物，在编码23S rRNA的DNA上设计一条引物进行嵌套式PCR。能特异性检测出支原体DNA，检测灵敏度与特异性都很高。
二、试剂盒组份
组份
012（20 assays）
储存条件
10×Taq Buffer（不含Mg2＋）
mL
-20℃
MgCl2（25mM）
mL
-20℃
Taq DNA Polymerase（5 U /μl）
100 U
-20℃
Myc F1 Primer (10μM)
50μL
-20℃
Myc R1 Primer(10μM)
50μL
-20℃
Myc F2 Primer(10μM)
50μL
-20℃
Myc R2 Primer(10μM)
50μL
-20℃
Control Template(1 ng/μl)
50μL
-20℃
DNA溶解液
2 mL
-20℃
ddH2O
5 mL
-20℃
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
离心机、微量移液器、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、dNTPs(10mM)、琼脂糖、溴化乙锭等
四、使用注意事项
整个实验，应规范操作，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。
操作方法
（细胞一般生长至80％左右即可，贴壁细胞不宜用消化液消化细胞，可以使用细胞刮刮取细胞），然后取细胞悬液200ul（约1～3×105细胞数）至