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免疫组化显色系统
Visualization Systems of
Immunohistochemistry(IHC)
免疫组化技术原理
用标记物或显色物标记抗体或抗原
通过免疫学中的抗原与已知抗体反应来检测组织或细胞内的97)
苏木精复染(S3309)
TBS冲洗(S1968)
二步法EnVision
特点:
二抗及酶通过葡聚糖连成一个大分子试剂(避开了传统的生物素与链亲和素结合), 不受内源性生物素干扰.
即用,方便,快速(两步).
敏感性强. 背景低.
是目前最理想的免疫组化显色系统
使用对象
可向所有做免疫组化的用户推荐.
EnVision二步法双染
原理:
与EnVision二步法原理相同, 只是为达到在同一组织上标记两种抗原. 必需用两种动物来源的一抗(常用抗小鼠和兔),分别配相应的EnVision(二抗) , 再用两种颜色的显色剂显色.
EnVision二步法双染
原理图
鼠一抗接抗原1
鼠EnV/HRP接抗鼠一抗
DAB(显色剂1)
双染阻断剂
兔一抗接抗原2
兔EnV/AP接抗兔一抗
Fast Red(显色剂2)
EnVision二步法双染
主要实验流程
阻断内过氧化酶(S2001)
TBS冲洗(S1968)
一抗(1 Mo.)孵育
TBS冲洗(S1968)
EnVision/HRP( 1 Mo.)
TBS冲洗(S1968)
显色剂 1 DAB(K3467)
蒸馏水冲洗
双染阻断剂(Kit含)
一抗(2 Rb.)孵育
TBS冲洗(S1968)
EnVision/AP( 2 Rb.)
TBS冲洗(S1968)
显色剂 2Fast Read(K0597)
蒸馏水冲洗
苏木精复染(S3309)
EnVision二步法双染
特点:
即用,方便,快速,省时.
敏感性强. 背景低.
在同一组织切片上, 用两种不同标记物标记两种不同的抗原.
使用对象
需在同一张切片上标记两种抗原者
主要是形态学科研人员
三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin)
原理:
应用生物素标记二抗与过氧化物酶或碱性磷酸酶标记链亲和素(Streptavidin)的亲和作用, 连接一抗及抗原, (显色剂)作用使之显色.
三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin)
原理图:
一抗与抗原结合
二抗/Bio与一抗结合
STPA/HRP(AP)与二抗/Bio结合
三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin)
主要实验流程
阻断内过氧(S2001)
TBS冲洗(S1968)
一抗孵育(Mo . Rb.)
TBS冲洗(S1968)
TBS冲洗(S1968)
二抗/生物素 ( )
TBS冲洗(S1968)
显色剂DAB或AEC(K3467或K0697)
Fast Read(K0597或K0699)
苏木精复染(S3309)
链亲和素/HRP或AP
蒸馏水冲洗
三步法 LSAB  (Labeled Streptavidin-biotin)
特点:
便宜
有现成的兔, 鼠, 羊通用试剂盒
会有内源性生物素造成的非特异性背景
使用对象
可向所有做免疫组化的用户推荐.
催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System)
原理
在经典三步法免疫组化放大基础上,通过生物素化酪胺的催化,将又一次加入的酶标记链亲和素(Streptavidin-enzyme)与二抗中生物素亲和,使已放大的分子再一次放大.
催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System)
原理图
一抗与抗原结合
二抗/Bio与一抗结合
STAV/Bio与
二抗/Bio结合
放大液催化
加入STAV/HRP
与Bio再结合
催化放大系统CSA (Catalyzed Signal Amplication System)
主要实验流程:
阻断内过氧(S2001)
水洗
TBS冲洗(S1968)
二抗孵育(Rb a-Mo/Bio)
TBS冲洗(S1968)
放大液(Kit含)
链亲和素/生物素 Strep./Bio (Kit含)
TBS冲洗(S1968)
显色剂DAB或AEC(Kit含)
苏木精复染(S3309)