高效液相色谱法.docx

高效液相色谱法
原理
样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离, 以石油醚萃取后 , 用正相色谱
柱提取富集, 用反相色谱柱, 紫外检测器定量测定。
适用范围
本方法来源于GB/T -1997 。适用于婴幼儿配方食品和高效液相色谱法
原理
样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离, 以石油醚萃取后 , 用正相色谱
柱提取富集, 用反相色谱柱, 紫外检测器定量测定。
适用范围
本方法来源于GB/T -1997 。适用于婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、
维生素D维生素E的测定；也适用于食品或强经食品及饲料中的维生素 D含量的 测定。
主要仪器
高压液相色谱仪, 具有可变波长的紫外检测器 ,数据处理系统或记录仪。
旋转蒸发器。
平底烧瓶:250mL。
分液漏斗:500mL。
试剂
所有试剂 , 如未注明规格 , 均指分析纯, 所实验用水均指蒸馏水。
异丙醇 : 色谱纯。
2%焦性没食子酸乙醇溶液：取2g焦性没食子酸溶液于100ma水乙醇中。
75%氢氧化钾溶液：取75g氢氧化钾溶于100mLzK中。
石油醚 : 沸程 30~60℃。
甲醇 : 色谱纯。
正己烷: 色谱纯。
环己烷: 色谱醇。
8)维生素D标准溶液
：含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维 生素D2,用甲醇定容于100mL容量瓶中。
维生素D3的标准贮备液：含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的 维生素D3,用甲醇定容于100mLW量瓶中。
操作步骤
样品处理：准确称取10g样品，于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸储水。
测定液的制备:
1)于上述样品溶液中加入100mLB 20哪:食子酸乙醇溶液，充分混匀后加 50mL75吸氧化钾溶液，在蒸汽浴上边续回流30min后，立刻冷却到室温。
2)将皂化液转入一 500m母液漏斗中，用100mLzK分几次冲平底烧瓶。洗涤 液并入分液漏斗中。
3)于上述分液漏斗中，加入100mL石油醴，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振 摇1 ，注意释放瓶内压力。静置分层，将水相放入另一 500m@ 液漏斗中 , 重复上棕萃取过程2 次 , 合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚
液至中性 , 通过无水硫酸钠过滤干燥, 在 40℃和氮气流下, 于旋转蒸发器上蒸至近于
(绝不允许蒸干)后,用石油醴转移至10mL容量瓶中,定容。
4)从上述容量瓶中取7mLM入一t管中，用氮气将石油醴吹干，于试管中加 1mL正己烷。
测定 :
测定液的制备:
A) 仪器条件 :
色谱柱:30cmx 40cm,硅胶柱。
流动相 : 正己烷与环己烷按体积比 1:1 混合 , %加入异丙醇。
流速 :1mL/min 。
波长 :265nm。
柱温 :20 ℃。
灵敏度:。
注射体积 :200mL。
B)注射50mLffi生素D标样和200mL羊品溶液，根据维生素D标样保