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一种细菌胞内谷胱甘肽含量的测定方法
一种细菌胞内谷胱甘肽含量的测定方法
本发明公开一种细菌胞内谷胱甘肽含量的测定方法，包括以下步骤：绘制不同浓度谷胱甘肽与荧光强度的标准曲线；采用平板菌落计数法进行菌落计数；设置待测菌液实验组和背景荧光对5，10，20 μ mol/L的标准品溶液，每梯度溶液中加入2 μ L mBBr试剂；
[0026]c)将步骤b)中配制的不同浓度谷胱甘肽溶液在37°C反应30min，用于荧光强度的检测；
[0027]d)绘制不同浓度谷胱甘肽与荧光强度的标准曲线。
[0028]进一步地,所述菌落计数的方法如下:
[0029]，按培养基与菌液体积比10:1接种菌悬液，过夜培养至稳定期；
[0030]，梯度稀释，以涂布法接种于平板，培养48h后，进行菌落计数。
[0031]优选地，细菌胞内谷胱甘肽含量的测定方法具体步骤为:
[0032]:；mBBr用DMSO制为10mmol/L母液，避光保存，避免反复冻融，工作浓度为100 μ mol/L ；
[0033]，每梯度溶液中加入等量的mBBr试剂；
[0034]°C反应30min，用于荧光强度的检测；
[0035]；
[0036]，在培养基上接种菌悬液，培养至稳定期；
[0037]，梯度稀释，以涂布法接种于平板，培养一段时间后，进行菌落计数；
[0038]，去上清；
[0039]，离心，去上清，重复此步骤；[0040]，分装于EP管中，作为实验组及背景荧光对照组；
[0041 ] ，混匀后立刻加入mBBr试剂；实验组加入mBBr试剂；
[0042] V反应;
[0043]，去除上清；重悬后重复此步骤；
[0044],置于60°C反应；
[0045]，混匀后离心，吸取上清液，用于荧光强度的检测；
[0046]，加入黑色遮光96孔板中，并覆盖锡箔纸遮光;
[0047]，测定步骤O中96孔板中样品的荧光强度；
[0048]，计算出样品谷胱甘肽含量，根据平板计数计算出样品细菌数量，谷胱甘肽含量与相应细菌数量的比值即为一定个数细菌胞内谷胱甘肽的量。
[0049]更优选地，具体步骤为:
[0050]:，_20°C避光保存I个月，避免反复冻融，工作浓度为100 μ mol/L ；
[0051]，I, 2，5，10，20 μ mol/L的标准品溶液，每梯度溶液中加入2 μ L mBBr试剂；
[0052]