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一种半定量河豚毒素检测卡的制作方法
一种半定量河豚毒素检测卡的制作方法
本发明公开了一种半定量河豚毒素检测卡的制作方法，包括以下步骤，a、胶体金样品组合垫的制备；b、层析膜的加工：用划膜仪将形成检测线的河豚毒素人工抗原与形成质控线的质控液进行标记，接着将胶体金标记的腹水，用硫酸铵沉淀，胶体金缓冲液溶解后， 用喷膜仪器喷到玻璃纤维膜上，真
空干燥； b、 层析膜的加工：用划膜仪将形成检测线的河豚毒素人工抗原与形成质控线的质控抗 体均匀地划在层析膜中间，干燥； c、 组装：将载体垫、所述层析膜、所述胶体金样品组合垫以及吸水垫拼接成层状结构， 所述载体垫位于底部，其上方设有所述层析膜，所述胶体金样品组合垫和所述吸水垫分别 设置于所述层析膜的两端，且所述胶体金样品组合垫和所述吸水垫分别与所述层析膜部分 重叠，所述检测线设置在靠近所述胶体金样品组合垫的一端，所述质控线设置在靠近所述 吸水垫的一端，用切条机将组装后的膜切割成条状结构，用卡式外壳进一步组装成检测卡。
[0012] 使用时，取2滴待测溶液滴加于检测卡的样品窗口（S)中，如果在质控线与检测线 都出现红线说明样品的中河豚毒素含量小于最低检测限；如果只在质控线出现有红线，说 明河豚毒素含量大于最低检测限，样品按倍数稀释后，用光学仪器检测质控线（C)与检测线 (T)颜色的深度的比值，进而计算出样品中河豚毒素的含量；如果质控线没有红线，说明试 纸检测失效。
[0013] 作为本发明的改进，将所述条状结构的所述胶体金样品组合垫放置在所述卡式外 壳的点样窗口，将所述条状结构上所述层析膜的检测线与质控线分别放置在所述卡式外壳 检测窗口的T端和C端，组装成卡式结构。
[0014] 作为本发明的改进，在胶体金样品组合垫的制备过程中，为了避免由于腹水中杂 蛋白太多，加样层析前端形成凝固物质，阻止样品层析并与硝酸纤维膜上的人工抗原及质 控抗体结合的问题产生，腹水在胶体金标记后还要用30%-50%的硫酸铵沉淀，离心，用胶体 金缓冲液溶解后，用喷膜仪器喷到玻璃纤维膜上，真空干燥。用腹水代替价格高昂的单克隆 抗体，提高抗体的使用效率，同时极大的降低了使用成本。
[0015] 作为本发明的改进，步骤a中的河豚毒素人工抗原是通过在河豚毒素粗制品中加 入牛血清蛋白，再加入乙酸钠缓冲液和乙醛于离心管在空气浴摇床后用PH7. 0的磷酸缓冲 液透析，接着冻干后制成。人工抗原通过河豚毒素粗制品制得，而不再使用河豚毒素高纯 品，其成本得到有效控制。
[0016] 作为本发明的改进，所述质控抗体为羊抗鼠二抗，所述河豚毒素人工抗原和质控 抗体的划膜浓度均为0. 5mg/mL-2mg/mL。
[0017] 作为本发明的改进，所述检测线和质控线的间距为0. 4cm-0. 6cm。
[0018] 作为本发明的改进，所述层析膜在室温25°C，相对湿度小于40%的气氛下进行干 燥。
[0019] 作为本发明的改进，所述层析膜为硝酸纤维素膜。
[0020] 作为本发明的改进，所述胶体金样品组合垫的上方部分覆盖有胶带层，胶带层能 有效起到良好的水封作用，这样便可避免加样量过多的情况发生。
[0021] 在组装完成后用切条机将条状结构的宽度控制在2. 9mm-3. 5mm。
[0022] 由上