《高效液相色谱》 (2).ppt

高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
HPLC
1
精选课件
高效液相色谱法
一、高效液相色谱法的特点
二、流程及主要部件
三、固定相和流动相
四、主要分离类型
五、影响注射泵
气动泵
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精选课件
进样系统
不使整个压力变化的情况下将样品注入色谱柱，通常使用所谓六通阀
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精选课件
色谱柱
色谱柱
泵
泵
1
2
进样
不使整个压力变化的情况下将样品注入色谱柱，通常使用所谓六通阀
进样系统
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精选课件
色谱柱
色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。
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精选课件
检测器
用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。
紫外-可见检测器
荧光检测器
电化学检测器
蒸发光散射检测器
质谱检测器
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精选课件
单波长UV检测器，光源用Hg灯，加滤光片可以到254，280，313，334，365等。生化中用到很多。
多波长 光度计类似，光栅或棱镜分光
A＝lg（I0/It)= εb c
紫外-可见检测器
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精选课件
荧光检测器
许多有机化合物，特别是芳香族化合物、被一定强度和波长的紫外光照射后，发射出较激发光波长要长的荧光。但可以与发荧光物质反应衍生化后检测。
 
特点： 有非常高的灵敏度和良好的选择性，灵敏度要比紫外检测法高23个数量级，特别适合于药物和生物化学样品的分析。
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精选课件
荧光检测器结构示意图
光源
检测器
滤光片
检测室
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精选课件
蒸发光散射检测器
蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测。
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精选课件
电化学检测器
（以电导检测器为例）
电导仪
电极
电极
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精选课件
标准样品法
谱库
HPLC-FTIR
HPLC-MS
定性分析
定量分析
峰面积∝浓度或质量
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精选课件
小结
四种色谱分离模式的分离机理及应用范围
反相色谱的概念
紫外可见检测器
常用的固定相和流动相
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精选课件
高效液相色谱应用实例
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精选课件
柱后pH调节电导检测
对有机酸具有高选择性和高灵敏度
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精选课件
有机酸分析系统流程图
2
3
4
8
7
5
6
9
10
1
1、2 泵
3 进样器
4 柱温箱
5 电导检测器
6 数据处理机
7 混合室
8 柱子
9 流动相
10 缓冲液
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精选课件
分析条件
分离条件
色谱柱：Shim-pack SCR-102H(．×300mmL.)
1个或2个分析柱连接
保护柱 SCR-102H (.×50mmL.)
流动相：5mM p-甲苯亚磺酸水溶液
流量 ：
温度 ：40℃或45℃
检测条件
缓冲液：20mM Bis-tris 水溶液
含 5mM p-甲苯亚磺酸和100μＭ EDTA
流量 ：
检测器：电导检测器 polarity;+
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精选课件
样品的分析实例
食品
啤酒，清酒，葡萄酒，酱油等
体液
血清，尿等
医药品
肾的透析液，钙制剂等
发酵
微生物培养液，酸奶等
环境
工厂废水等
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精选课件
有机酸标准品的色谱图1
一个分析柱
1. 磷酸
2. 柠檬酸
3. 丙酮酸
4. 苹果酸
5. 琥珀酸
6. 乳酸
7. 甲酸
8. 乙酸
9. 乙酰丙酸
10. 焦谷氨酸
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精选课件
啤酒的色谱图
1. 磷酸
2. 柠檬酸
3. 丙酮酸
4. 苹果酸
5. 琥珀酸
6. 乳酸
7. 甲酸
8. 乙酸
9. 焦谷氨酸
10. 碳酸
前处理
振荡除去碳酸气后，
过滤10μＬ进样
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精选课件
清酒的色谱图
1. 磷酸
2. 柠檬酸
3. 丙酮酸
4. 苹果酸
5. 琥珀酸
6. 乳酸
7. 乙酸
8. 焦谷氨酸
前处理
过滤后，进样10μＬ
min.
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精选课件
葡萄酒的色谱图
1. 磷酸
2. 柠檬酸
3 . 酒石酸
4. 苹果酸
5. 琥珀酸
6. 乳酸
7. 甲酸
8. 乙酸
9. 焦谷氨酸
前处理