蝮蛇蛇毒中提取的一种具有激肽原酶活性的蛋白水解酶.doc

蝮蛇蛇毒中提取的一种具有激肽原酶活性的卵白水解酶
　　摘要】目的:从蛇毒中得到大量高纯度的具有激肽原酶活性的卵白水解酶。要领:接纳离子互换和亲和层析技能举行纯化。效果:从江浙蝮蛇毒中提取出了一种高纯度的具有激肽原酶活性的卵白水解酶,不需活蝮蛇蛇毒中提取的一种具有激肽原酶活性的卵白水解酶
　　摘要】目的:从蛇毒中得到大量高纯度的具有激肽原酶活性的卵白水解酶。要领:接纳离子互换和亲和层析技能举行纯化。效果:从江浙蝮蛇毒中提取出了一种高纯度的具有激肽原酶活性的卵白水解酶,不需活化即可水解激肽原,开释激肽,并具有精氨酸酯酶活性。粗毒经提纯,比活可达800u/g以上,远远高于哺乳动物泉源的激肽原酶,纯度可达95%以上。对其性子观察,r为38000,n-末了的15个氨基酸序列阐发表白,该酶与蛇毒丝氨酸卵白酶及胰卵白酶——激肽开释酶同源。结论:这种要领得当于产业化消费。【关键词】江浙蝮蛇蛇毒激肽原酶
　　自从有人在美洲锋芒蝮蛇(bthrpsjararaa)蛇毒中创造激肽原酶后,蛇毒激肽原酶越来越受到宽大学者的器重［1］。我国蛇类资源富厚,但受提纯工艺的限定,至今仍未开拓出蛇毒激肽原酶的药物制剂。我们接纳离子互换和亲和层析技能,从江浙蝮蛇〔agkistrdnhalyspallas〕蛇毒中提取了高纯度的激肽原酶,并对其性子举行了研究。
　　1质料和要领
　　〔辽宁省清源县〕,deae-sepharse,琼脂糖凝胶〔瑞典pharaia公司〕,苯甲酰精氨酸乙酯〔baee〕,对甲苯磺酰精氨酸甲酯〔tae〕,尺度卵白,激肽原,激肽等底物〔siga公司〕,低压型高效液相色谱仪〔日本岛津公司〕,8823b紫外检测仪〔北京宾达英创科技〕,balb/小鼠〔7周龄〕由中国药品生物成品检定所实行动物中央提供。
　　
　　2效果
　　-sepharse阴离子互换层析,亲和层析,可将杂质卵白撤除,得到的样品经hpl查验,纯度可达95%以上。
　　图1deae-sepharse离子互换色谱图〔略〕
　　透过峰事后,梯度洗脱得到5个峰,经定性检测3,4号峰为活性峰.
　　图2蛇毒激肽原酶亲和色谱图〔略〕
　　1:平衡液洗脱透过峰;2:为亲和洗脱液洗脱所得活性峰.
　　图3激肽原酶纯度查验图谱〔略〕
　　色谱条件:tsk-2000凝胶柱,280n检测,,〔〕为活动相,对峰面积积分,主峰面积达95%以上.
　　图4激肽原酶sds聚丙烯酰胺电泳图谱〔略〕
　　:分子量尺度品;s:蛇毒激肽原酶样品.
　　,提纯高的激肽原酶比活进步了约300倍,活力接纳率可达60%以上,水解baee的比活可到达800ｕ/g以上,水解tae活性较低,约是水解baee活性的5%。
　　,江浙蝮蛇毒激肽原酶的r约为38000,与构造型激肽原酶相似。
　　、哺乳动物胰卵白酶n末了氨基酸序列［4］比力蛇毒激肽原酶与其他它丝氨酸卵白酶具有同源性,属丝氨酸卵白酶的一种,且与哺乳动物的胰卵白酶——激肽开释酶具有同源性。
　　表1江