测定黄瓜籽中蛋氨酸和苯丙氨酸.doc

测定黄瓜籽中蛋氨酸和苯丙氨酸
前言
黄瓜籽是民间接骨壮骨及补钙的最佳秘方,对骨质疏松、腿脚抽筋、风湿病、关节炎、颈椎病及肝胃脾肺等脏器的疾病有恢复治疗和保健的功能【2】。氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质,是在生物体内构成蛋白质分子的基本单位,与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗体内具有特殊的生理功能,是生物体内不可缺少的营养成分之一。所以说氨基酸对人体是有着极其重要的作用的【3】。
必需氨基酸指的是人体自身不能合成或合成速度不能满足人体需要,必须从食物中摄取必不可少的氨基酸。对成人来讲必需氨基酸共有八种:赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸。
蛋氨酸不仅是人体十分重要的必需氨基酸,而且大豆等主要植物蛋白源与家禽饲料的第一限制氨基酸。它不仅广泛应用于食品强化剂,动物饲料添加剂,还用于防止肝病,蛋白缺乏症及砷,苯中毒的解药等【4】。苯丙氨酸是人体必需的8种氨基酸之一,可用于氨基酸输液,综合氨基酸制剂,合成抗癌药物【5】、抗病毒药物的开发利用,以及用于孕妇营养补剂和婴幼儿的特殊奶粉,烟酸缺乏症治疗药等,是重要的营养物质
1. 实验部分
1

利用氨基酸与茚三酮溶液专一呈色反应进行比色定量测定。茚三酮和游离氨基酸在酸性条件下进行反应,氨基酸被氧化分解成醛、NH3 和CO2 ;水合茚三酮被还原,还原型茚三酮又与NH3和另一分子茚三酮进一步缩合生成紫红色化合物。
反应式如下:
OCOHOH
COOH
C
COHH
OH
+NH2
+NH3+
CO2+RC
茚三酮
氨基酸还原型茚三酮
醛类
OC
CH
HO
OC
CHNC+ 3H2O
C+NH3+
HO
OH
蓝紫色产物
用722S 型分光光度计测吸光值,以浓度值为横座标,吸光值为纵座标绘出氨基酸标准曲线图。黄瓜籽样品稀释适量倍数后,与标准样同时测定,通过标准曲线得出氨基酸含量。【6】【7】

水浴锅,722S 型分光光度计,FA-2004电子精密天平,
蛋氨酸,柠檬酸,檬酸三钠,茚三酮,乙醇,苯丙氨酸,Na2HPO4,NaH2PO4,


①5ug/mL蛋氨酸溶液的配制:。
②1000ug/mL苯丙氨酸溶液配制: Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液。
①:。。然后合并两个溶液。并调节pH值为5。
②-NaH2PO4缓冲容易的配制【8】:
的Na2HPO4定容至 50ml。。然后合并两个溶液。并调节pH值为6。

2
①%的茚三酮显色液:。
②。

分别吸取浓度为5ug/mL蛋氨酸标准溶液0、2、4、6、8、10ml于每个25ml试管中, ,摇匀后用铝箔封好试管口,放在100℃沸水浴中煮10min,用自来水冷却至室温,再分别加入25ml 蒸馏水摇匀。此浓度为0、、、、、2ug/mL系列蛋氨酸标准溶液。分别吸取浓度为1000ug/mL苯丙氨酸标准溶液0、1、、2、、3ml于每个25ml试管中,,摇匀后用铝箔封好试管口,放在90℃沸水浴中煮5min,用自来水冷却至室温,再分别加入10ml 蒸馏水摇匀。此浓度为0、100、150、200、250、300 ug/mL系列苯丙氨酸标准溶液。

称量黄瓜籽粉 5 .001 4 g置于l 00 mI的锥形瓶中,加入盐酸:甲醇( 1: 100体积比) 约8 0 mI,6 0 C水浴加热15mi n,然后置于超声波清洗器中超声 30min冷却至室温,静置24h 。用甲醇定容至100ml过滤后,取过滤液作为供试品液。



分别吸取浓度0、、、、、2ug/mL系列蛋氨酸标准溶液,分别再