植物根系酸性磷酸酶活性测定.pdf

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该方法以对硝基苯磷酸二钠(即p-NPP)为底物,该底物在土壤酸性磷酸酶的催化
下水解生成黄色的对硝基苯酚(即p-NP),该黄色溶液在410nm处有最大吸收光值,根
据对硝基苯酚的生成数量与黄色溶液的吸光度呈正比来进行定量分析,以此来反映土壤
酸性磷酸酶的活性。酶活性是以单位时间内单位重量鲜根或单株根系水解p-NPP生成的
对硝基苯酚(p-NP)的量来表示(μg·h-1·g-1鲜根或μg·h-1/株)。

1)称取(±)g鲜根,(),然后进行冰浴
研磨,双层纱布过滤,12000r/min离心15min,静置。
2)取上清液1mL于15mL离心管中,(醋酸钠
缓冲液配制),摇匀后加盖,于37℃水浴30min。
3),摇匀。
2
4)2500r/min离心5min,取上清液于15mL离心管中,4000r/min下再离心5min。
)取上清液在410nm波长比色,并记录吸光值A。
5410

1)取13支15mL离心管,按顺序编号,并按表1加入试剂。
表1对硝基苯酚标准曲线配制表
离心管号0123456
.
(mL)
HO(mL)
2
pNP含量(μmol)
离心管号789101112
.
(mL)
HO(mL)
2
pNP含量(μmol)
摇匀

(mL)2
2
2mol/LNaOH(mL)2
2)混匀后,在2500r/min下离心5min,再在4000r/min下离心5min以0号作为对照,
在410nm波长下测光吸收值,并记录光吸收值A。
410
3)以吸光值为横坐标、对硝基苯酚的含量为纵坐标计算直线回归方程y=a+bx及相
关系数R,即对硝基苯酚含量n(mol)abA。
410

根系酸性磷酸酶活性是以单位时间内单位重量鲜根或单株根系水解p-NPP生成的对
硝基苯酚(p-NP)的量来表示(μg·h-1·g-1鲜根或μg·h-1/株)。
即根系酸性磷酸酶活性(gh1g1鲜根)nM稀释倍数(/Wt)
式中:n—标准曲线上查得样品中对硝基苯酚的浓度(μmol);
M—对硝基苯酚的相对分子质量();
t—反应时间(h);
W—样品鲜重(g)。
稀释倍数—8
(pH=)
A:(,稀释至1000mL)
B:(·3HO定容至1000mL)
2322322
+