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菌落总数的测定

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总菌数可作为判定被检样品被有机物污染程度的标志。细菌数量越多,则检样中有机物质含量越大。食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。平板菌落计数法是一种应用广泛的测定微生物的生长繁殖的方法,其特点是能测定样品中活细胞数,故又称活菌计数法。平板菌落计数法是将食品检样样品经处理后,按比例地做一系列稀释液(通常为10倍系列稀释法),再吸取一定量某几个稀释度的菌悬液于无菌培养皿中。经过培养,统计菌落数,根据其稀释倍数和吸取接种量即可换算出食品检样中的含菌数。

恒温培养箱,冰箱,恒温水浴锅,天平(),研钵,振荡器,无菌吸管或微量移液器及吸头,无菌锥形瓶,无菌培养皿,pH计或精密pH试纸,放大镜或/和菌落计数器,牛肉。

(plate count agar,PCA)培养基

胰蛋白胨 g
酵母浸膏 g
葡萄糖 g
琼脂 g
蒸馏水 1000 mL
pH ±

将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。分装试管或锥形瓶,121 ℃高压灭菌15 min。


磷酸二氢钾(KH2PO4) g
蒸馏水 500 mL

贮存液: g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中,用大约175 mL的1 mol/,用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液: mL,用蒸馏水稀释至1 000 mL,分装于适宜容器中,121 ℃高压灭菌15 min。


氯化钠 g
蒸馏水 1 000 mL

000 mL蒸馏水中,121 ℃高压灭菌15 min。

:称取25g牛肉将其放入研钵中研磨捣碎后置于盛有225mL另算言缓冲液或生理盐水中进行充分混匀,制成1:10的样品匀液。
:用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。依次制成1:1000,1:10000······每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。
:根据对样品污染状况的估计,选择2~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10 倍递增稀释时,吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。及时将 15 mL~20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。