部分放射免疫药.doc

部分放射免疫药盒
说明书
北京普尔伟业生物科技有限公司
中国人民解放军总医院科技开发中心
核准日期:2001年12月28日
修改日期:2006年12月12日
碘[125I]血栓烷B2放射免疫分析药盒说明书
【药品名称】
通用名称:碘[125I]血栓烷B2放射免疫分析药盒
英文名称:Iodine[125I]Thromboxane B2 Radioimmunoassay Kit
汉语拼音:Dian [125I] Xue shuan wan B2 Fangshemianyifenxi Yaohe
【适应症】
概述及临床意义:血栓烷A2(TXA2)主要是由血小板微粒体合成并释放的一种强烈促进血管收缩和血小板聚集的生物活性物质。其生物半衰期约30分钟,而迅速代谢为无活性的血栓烷B2(TXB2)。在正常生理状态下血浆或组织中TXA2和PGI2 平衡失调是造成血小板聚集,血管痉挛收缩或血栓形成的原因之一。因此,测定这两种化合物在血浆、组织及其它体液中的浓度,在基础医学理论研究,临床血栓形成病的发病预测,疗效判断具有十分重要的意义。
测定原理:利用液相竞争抑制原理,采用平衡法对样品进行测定。待测样品或标准与限量的抗血清及标记抗原加在一起进行竞争性结合反应,反应完全后,加入免疫分离剂,分离出抗原-抗体复合物,测定复合物的放射性(B),计算各标准管的结合率(B/B0﹪)。作出标准曲线,查出样品浓度。
【成份】
药盒组成及配制
1、缓冲液A:1瓶(液体),10ml,摇匀后直接使用。
2、缓冲液B:1瓶(蓝色,液体),30ml,摇匀后直接使用。
3、TXB2标准品:1支(白色,冻干粉)。临用前加缓冲液A ml溶解(如不填写,加缓冲液A2ml溶液),浓度为800pg/ml,作为S7,另取试管6支编号S6 – S1。各加缓冲液A 1ml,从S7中取1ml加到S6,依次倍比稀释至S1,,25,50,100,200,400,800pg/ml。
4、TX B2抗血清:1瓶(白色,冻干粉),用缓冲液B ml溶解,(如不填写,100T药盒加缓冲液B ,50T药盒加缓冲液B )。
5、125I - TXB2:1瓶(白色,冻干粉),用缓冲液B ml溶解,(如不填写,100T药盒加缓冲液B ,50T药盒加缓冲液B )。
6、PR分离剂:1瓶(液体),100T药盒60ml,50T药盒30ml,使用前充分混匀,直接使用。
样品收集
1、血浆:取一次性5ml空针吸取消炎痛- ,快速静脉穿刺取血3ml,即刻在空针内颠倒混匀,注入试管内(可按比例增加或减少取血量),4℃离心3500rpm,15min,分离血浆,放-20℃保存。注:测定大鼠血浆时,最好做预实验,以确定是否需要稀释以及稀释倍数。
注:消炎痛- ,.
测定兔血浆时,应进行提取。,加入1N HCL 50μl,,离心15min,吸取上清放一青霉素瓶中,,吸取上清置于同一瓶内,将瓶中液体吹干,放-20℃保存。,混匀后即可作样品使用。分析纯乙酸乙脂需用户自备。*
2、组织:取新鲜活组织即刻置液氮中保存。或快速称取一定重量(依组织不同可称取5~20mg)置微型匀浆器中,,,4℃离心(3500rpm,15min)取上清,-20℃以下保存。测定前最好做预实验确定样品稀释度。
3、尿液:尿液收集12小时,晚7时排尿弃去,向容器内加冰醋酸或甲苯4ml防腐,至次日早7时留取12小时内尿液收集在瓶中,混匀,量总ml数,留5ml放-20℃以下保存。。
测定方法
本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
TXB2 RIA加液程序(μl)
T NSB S0 S 1– S7 样品
缓冲液A – 200 200 ––
缓冲液B – 100 –––
标准液––– 200 –
待测样品–––– 200
抗血清–– 100 100 100
125I -TXB2 100 100 100 100 100
充分混匀,放置4℃ 24h
PR分离剂– 500 500 500 500
充分混匀,室温放置20min, 4℃3500rpm离心 25min,吸弃上清,测各管沉淀cpm数
结果计算
1、以B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/BO计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准