鸡肝中过氧化氢酶提取,和大肠杆菌质粒提取.doc

鸡肝中过氧化氢酶提取,和大肠杆菌质粒提取
大肠杆菌中质粒的小量提取及核酸电泳
摘要:采用碱裂解法将大肠杆菌中的质粒DNA分子进行分离和纯化,将分离纯化后的质粒DNA分子进行琼脂糖凝胶电泳,并在紫外成像仪中观察DNA条带,以测定所得到的质粒DNA片段的分子量大小。结果表明,成功从大肠杆菌中提取出质粒DNA分子,其分子量大小约为2000bp。
关键词:质粒DNA分子;碱裂解法;分子量;电泳
引言
质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法,碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在碱性电泳缓冲液中带负电荷,所以在外加电场作用下会向正极迁移。将提取到的DNA分子提取液中加入核酸染色剂,经过琼脂糖凝胶电泳后,利用紫外灯照射即可观察到所提取的DNA条带,第一泳道加入合适的Marker与之进行比对,即可较为准确地估测出所提取出的质粒DNA分子量。 1 材料与方法
实验材料
(1) 含质粒Psd-T19的大肠杆菌
(2) 试剂:细菌质粒小量提取试剂盒、琼脂糖,电泳缓冲液(TAE),核酸电泳上样缓冲液(6×),标准分子量的DNA等。
实验仪器
微量移液器、试管、微波炉、离心机、电泳仪、凝胶成像系统、天平。
质粒的提取(小量试剂盒提取)
(1) ,台式离心机中12000r/m离心1min,弃上清液得到大肠杆菌菌体;
(2) 按照试剂盒提取的步骤提取出大肠杆菌质粒DNA。
核酸电泳
(1) 制备1%琼脂糖凝胶,并添加GoldVied I核酸染料;
(2) 加样:在离心管中混合DNA样品2-3ul和1ul上样缓冲液。采用梯度上样,上样量分别为2ul、4ul、6ul、8ul和5ulDNA分子量标记;
(3) 电泳:120V,40min;
(4) 观察:将电泳后的凝胶放置于透射紫外光下进行观察,对照分子量标记判断DNA样品的分子量大小。
2 实验结果与分析
大肠杆菌在37℃恒温摇床中220r/min培养24h,离心收集菌液收集菌液,之后按照试剂盒的操作步骤进行质粒提取纯化,最后进行核酸电泳,电泳图如图1-1所示。其中1,2,3,4分别代表质粒的上样量分别为2μL,4μL,6μL,,8μL,M代表5μL标准品。
DNA分子的分子量、分子构型的差异和所带电荷多少,都会影响电场中其迁移速率,另外琼脂糖凝胶的浓度、电压大小、缓冲液pH和电泳时的温度等也影响迁移率,从而使DNA分子在凝胶中出现不同的区带。如图
1-1所示,从大肠杆菌中提取的质粒DNA分子的分子量大小为2000bp,梯度上样的对比结果表明最适上样量为6ul。
图1-1 1%核酸电泳图
3结论
所提取的质粒DNA分子量为2000kb,琼脂糖凝胶电泳最适上样量为6ul。
参考文献
[1] 叶枫,董兴齐,[J].地方病通报,1994,9(4):66.
[2] [J].湛江师范学院学报,30(6):83-85.
2009,
鸡肝