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培养基的灭菌及保存方法
灭菌方法
1、高压蒸汽灭菌: 高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培
养基在爱制备过程中混入各种杂菌,分装后应立即灭菌,至少应在 24h 内完成灭菌工作。
压力下,温度121℃时,灭菌15~30min 即可。消毒时间不宜过长,
也不能超过规定的压力范围,否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解,失去
营养作用,也会使培养基变质、变色,甚至难以凝固。
将蒸馏水或自来水装在三角瓶中,装水量一般不超过瓶的 2/3,用牛皮纸或硫酸纸包扎
封口,然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。
灭菌后的培养基可放到培养室中预培养 3d,若无污染现象,则证明灭菌是彻底的,可以
使用。暂时不用的培养基最好置于 10℃下保存。含 IAA 或 GA3的培养基应在1周内用完,其
他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌:一些植物生长调节剂及有机物,如 IAA、GA3、ZT、CM 等,遇热容易
分解,不能与培养基一起进行高温灭菌,而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤
器与滤膜()使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中,
若为液体培养基,可在培养基冷却至 30℃时加入;若为固体培养基,必须在培养基凝固之
前(50-60℃)加入,振荡使溶液与其他成分混合均匀。
保存方法
已经灭菌完毕的培养基从高压灭菌锅中取出后,立即放在平整的台面上,若大批量生产
可用果箱装好并标记好其用选后,送到接种室,让其自然冷却凝固。灭好的培养基最好经
过3d 的预培养,以便观察培养基是否彻底灭菌,这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养
基,在接种前被检出,可避免杂菌污染而造成不必要的损失,这点对少而重要的材料尤其
值得注意。但是在同等条件下经多次使用无污染后,就没必要再摆3d 后才使用, 而是冷却
凝固后就可使用了。
(1)防尘
已经灭好菌的培养基要注意防尘。如果培养基在卫生条件差的地方贮存,依附在尘埃中
的细菌、真菌等会落在培养瓶表面,使用前若不进行表面灭菌处理,在接种时就容易随着
气流进入容器,使其受到污染,影响组织培养工作的顺利进行,因此培养基必须放在干净、
卫生的接种室内。
(2)避光
备用培养基应贮于光线较暗的房子里面,因为吲哚乙酸等某些物质易见光分解。在光照
下,一些培养基添加物的成分也会发生变化。在接种室里挂上较厚的窗帘或在培养基的箱子
上加盖厚的黑布,这样可以使培养基免受光线的影响。
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