人用狂犬病疫苗中β―丙内酯残留量的检测.doc

人用狂犬病疫苗中β―丙内酯残留量的检测
【摘要】目的:检测人用狂犬病疫苗中BPL的残留量。方法:采用气相色谱法检测BPL含量,确定最低检出限,并分析BPL在37℃条件下的水解变化情况,检测人用狂犬病疫苗中的β-丙内酯的残留量。结果:,对人用狂犬病疫苗中的β-丙内酯进行检测,未发现残留。结论:气相色谱法检测BPL残留量的灵敏度较高,结果可靠,可用于人用狂犬病疫苗生产过程中BPL残留量的检测。
【关键词】β-丙内酯(BPL) 气相色谱法人用狂犬病疫苗
【中图分类号】 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-8801(2014)03-0326-02
β-丙内酯(β-Propiolactone,BPL)又名羟基丙酸内酯,是一种杂环类化合物(C3H4O2),沸点155℃,常温下为无色黏稠状有刺激气味的液体,对病毒具有很强的灭活作用,其灭活机制是作用于核酸,改变其结构以达到灭活目的,在不破坏病毒抗原的同时,又能保持病毒良好的免疫原性;BPL水解后为无毒性的人体脂肪代谢产物β-羟基丙酸,常用于病毒类疫苗特别是人用狂犬病疫苗的灭活。
但BPL是一种致癌物,对皮肤、黏膜及眼睛有刺激性,因此必须对疫苗中的BPL含量进行检测,确保其已被完全水解,保证疫苗的安全性。本文采用气相色谱法检测了BPL的残留量,并对人用狂犬病疫苗中是否有BPL残留进行了检测,现将结果报告如下。
1 材料与方法
仪器与试剂
仪器
Agilent 公司7890A气相色谱仪。
试剂
β-丙内酯,购自德国SERVA, g/ml。
PBS缓冲液();人用狂犬病疫苗原液(以β-丙内酯灭活,批号T-RB20130101,T-RB20130102,T-RB2013003),由成都生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究室提供。
方法
气相色谱法分析条件
毛细管色谱柱为Agilent DB-624;载气为氮气,流速5ml /min;气化室温度180℃;检测器温度250℃;柱温120℃;。
绘制标准曲线
BPL用PBS缓冲液()作1:1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000、1:64000、1:128000、1:256000、1:512000稀释,分别进样,进行气相色谱法测定。以BPL含量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,同时以PBS缓冲液()作空白对照。
BPL重复性检测情况
BPL用PBS缓冲液()作1:4000稀释,进样6次,进行气相色谱法测定,考察BPL重复性检测情况。
BPL水解变化情况
BPL用PBS缓冲液()作1:4000稀释,37℃水浴水解,每隔30min抽样进行气相色谱法测定,检测BPL含量。
人用狂犬病疫苗原液中BPL水解情况检测
批人用狂犬病疫苗原液按1:4000比例加入BPL灭活,37℃水浴水解2h,抽样进行气相色谱法测定,检测BPL含量。
2 结果
标准曲线绘制
随着BPL稀释倍数的