中药材川贝母的DNA分子标记鉴定研究.doc

中药材川贝母的DNA分子标记鉴定研究.doc:..中药材川贝母的DNA分子标记鉴定研究摘要:贝母为常用贵重中药材,药用历史悠久,我国贝母属槓物已超过50种(变种),全国各地用作贝母的原植物种类繁多,此外商品贝母中还常混有土贝母、唐菖蒲等伪品,严重影响了药品的安全性和有效性,由于贝母类药材的形态学上的差异较小,但是化学成分差异大,因此准确地鉴定贝母类药材的基源种类是一项极为重要的工作,为了探索贝母类药材的快速、准确的鉴别方法,运用分子标记技术鉴定川贝母的真伪,以克服目前仅依据形态、显微特征及理化进行鉴别的不足。关键词:川贝母;DNA;PCR【中图分类号】R284【文献标识码】B【文章编号】1672-8602(2014)03-0196->、甘肃贝母FritillariaprzewalskiiMaxim.、梭砂贝母FritillariadelavayiFranch.>太白贝母FritillariataipaiensisP・・Hsiavar・)Z・D・・。按性状不同分别习称〃松贝〃、〃青贝〃、〃炉贝〃和〃栽培品〃。川贝母性微寒而味甘苦,入心肺经,能润肺、止咳、化痰,是一味珍贵的中药材。〃中国药典〃规定药用川贝母为以上6个晶种,但我国贝母属植物己超过50种,造成贝母基源极为复杂,并且随着需求量的增加,基源混乱的现象呈现不断增加的趋势,直接影响川贝母临床用药的安全、疗效。运用分子标记技术鉴定川贝母的真伪,以克服目前仅依据形态、显微特征及理化进行鉴别的不足。使屮药鉴定的手段从传统的形态表征扩展到了遗传物质DNAo特别是近年来微量DNA的PCR技术的应用发展,使分子生物学技术与方法以特异性强,稳定性好,微量、准确等特点,被广泛应用于近缘种、珍稀种、破碎药材等的鉴定。本实验应用分子生物学技术对川贝母进行了研究,建立了川贝母DNA分子标记鉴定方法,为川贝母与其伪品的鉴定提供了科学依据。:(1)伊贝母对照药材、平贝母对照药材、湖北贝母对照药材、浙贝母对照药材、川贝母对照药材(中国药品生物制品检定所)。(2)青贝、炉贝、浓蜜贝母(广西锦莹药业有限公司)。:新型植物基因组DNA快速提取试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司);10XPCR缓冲液、二氯化镁(25mmol/L)、dNTP(10mmol/L).鉴别引物:5'GTAGGTGAA3'和5'GCTACGTTCTTCATCGAT3'、无菌超纯水、琼脂糖、50XTAE电泳缓冲液、DNA分子量标记物GM331(上海生工);GclRcd核酸凝胶染色剂(BIOTIUM);高保真TaqDAN聚合酶(5U/ul)、10X酶切缓冲液、SmaT(10U/ul)(Fermentas):H1850型台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);K960型热循环仪(杭州晶格仪器有限公司);DYCP-31DN型电泳