DAPI染色.docx

DAPI染色.docxDAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole) ,分子式为 C16H15N5·2C3H6O3,。DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外,因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm,最大发射波长为488nm;当DAPI与双链DNA结合时,最大吸收波长为364nm,最大发射波长为454nm(,100mMNaCl,10mMEDTA),其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合,但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5,其发散光的波长范围约在500nm左右。DAPI的配制及贮存固体粉末:避光,2-8℃保存,3年没有问题。贮存液:用无菌水配制成浓度 1mg/ml 的贮存液,配好后用锡纸包起来, 避光,可在-20 ℃下长期保存。(DAPI易溶于水,在 PBS中溶解度不高)使用浓度 :贮存液用 1xPBS稀释到终浓度 100ng/ml 。荧光封片液 : 碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合, :制好的玻片上滴加几滴 DAPI染液,染色 10分钟,流水冲去染液,滤纸吸除多余水分,加一滴荧光封片液,置于荧光显微镜下观察,激发波长 360-400nm 。注意事项 :DAPI可能具有致癌性,全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。