实验二 总糖和还原糖的测定(DNS).doc

──3,5-二硝基水杨酸比色法 一、目的要求: 掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。   三、试剂和器材 1、试剂3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂:(不适宜用高温促溶),接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中(192g就是酸甲钠溶于500ml水中),再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠,摇匀溶解后,冷却定容至1000ml,暗处保存备用。葡萄糖标准溶液:准确称取在105℃,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至1000ml。6mol/LHCl:取250ml浓HCl(35%~38%)用蒸馏水稀释到500ml。碘-碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。6NNaOH:称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。%酚酞指示剂:。1%淀粉2、材料淀粉。 3、器材WFJUV-2000型分光光度计,水浴锅,电炉,10ml比色管。四、操作方法 1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml比色管并编号,按下表顺序加入各种试剂。(表1)试管号0(空白)12345葡萄糖标准液/...,取出后用流动水迅速冷却,,摇匀(用10mL比色管,加蒸馏水补齐至5mL刻度线),在540nm波长下,用0号管调零,分别读取各管的吸光度值A540。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。  2、淀粉水解及还原糖的提取取1%淀粉25mL,放在100mL烧杯中,加入6mol/LHCl10mL,然后加入蒸馏水15mL,混匀,于沸水浴中保温30min,取出1~2滴置于白瓷板上,加1滴I2-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6NNaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到100mL,从中取10mL于100mL容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为稀释