DNS法测定总糖和还原糖.docx

实验九 总糖和还原糖的测定（二）
── 3,5－二硝基水杨酸法
一、目的要求：
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理 :
NaOH 和丙三醇存在下， 3,5－二硝基水杨酸（ DNS ）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量
NaOH 碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与
光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
OH NO 2
OH NH 2
HOOC
+ 还原糖
HOOC
NO 2
NO 2
(DNS)
（3－氨基 －5 －硝基 水 杨酸 ） ?
黄色 桔红色
三、试剂和器材
1、试剂
（ 1） 1 mg/ml 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖 100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至
100ml ，即含葡萄糖为 。
（ 2） 3,5— 二硝基水杨酸试剂：称取 g 3,5 — 二硝基水杨酸并量取 262 ml 2mol/L NaOH 加到酒石酸钾纳的热溶液中（ 182 g
酒石酸钾纳溶于 500 ml 水中），再加 5 g 结晶酚和 5 g 亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到 1000 ml 贮于棕色瓶中。
3）碘－碘化钾溶液：称取 5g 碘， 10g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水中。
4） 6N NaOH ：称取 120g NaOH 溶于 500ml 蒸馏水中。
5） % 酚酞指示剂。
6） 6 mol/L HCl 溶液
2、材料
小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材
分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法
1、葡萄糖标准曲线制作
取 8 支 15mm× 180mm 试管，按下表加入
葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号
试剂
0
1
2
3
4
5
6
7
8
葡萄糖标准液 (ml)
0








蒸馏水 (ml)









水杨酸溶液 (ml)









葡萄糖含量 (mg)
0








将各管溶液混合均匀，在沸水中加热
5 min ，取出后立即用冷水冷却到室温，
再向每管加入 ml 蒸馏水，摇匀。
λ =540nm 处测定吸
光度
以葡萄糖含量（ mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品中还原糖的提取
准确称取 小麦（淀）粉，放在
100ml 烧杯中