莪术油对白血病细胞株的体外抑制作用.doc

莪术油对白血病细胞株的体外抑制作用
【关键词】莪术油
摘要:【目的】通过比较莪术油对白血病细胞株HL-60和K562抑制作用的敏感性,评估该药物用于治疗白血病的临床意义及价值。【方法】取HL-60、K562细胞传代接种于96孔板,同时每孔分别加入不同浓度的莪术油液100?μL(终浓度分别为400、200、100、50?mg/L);空白对照组加入100?μL含体积分数为1%吐温80?的RPMI-1640培养液。药物和细胞作用24、48、72?h后,每孔加入四氮唑化物(MTT)10?μL(5?g/L),37?℃孵育后于570?nm波长处用酶联免疫检测仪测其D值,计算细胞生长抑制率(RI)。【结果】莪术油对HL-60、K562细胞的生长抑制作用随着作用时间的延长明显增加,24、48、72?h的抑制率之间差异有显著性(P<001);莪术油对HL-60、K562细胞的生长抑制作用随着药物浓度的增加而增加,400、200、100、50?mg/L的抑制率比较有显著性差异(P<001)。但莪术油对HL-60、K562两种细胞的生长抑制作用比较无显著性差异(P>005)。【结论】莪术油对HL-60、K562细胞的生长有抑制作用,且其抑制作用与药物浓度和作用时间相关。
关键词:莪术/药理学;莪术油/药理学;白血病/中药疗法; HL-60细胞/药物作用;K562细胞/药物作用
莪术油在实体瘤的治疗中已取得较满意的效果,近年来也有用莪术油治疗白血病的临床报道[1],但至今莪术油对白血病的作用机理尚不清楚。本研究通过观察在不同药物浓度和不同作用时间条件下,莪术油对白血病细胞株HL-60和K562细胞的抑制作用,比较莪术油对不同白血病细胞株的敏感性,以评估该药物用于治疗白血病的临床意义和价值。
1 材料
11 主要试剂
莪术油:广东省中医院制剂室提供;吐温80:美国Sigma公司产品;RPMI-1640培养液:德国Gibco公司产品;新生牛血清:杭州四季青生物工程材料有限公司产品;四氮唑化物(MTT):美国Sigma公司提供。
12 主要实验仪器
超净工作台:北京伟达净化厂生产;二氧化碳培养箱:美国NAPCO公司产品;恒温磁力搅拌器:上海司乐仪器厂生产;倒置显微镜:日本NIKON公司产品;超低温冰箱:日本SANYO公司生产;电子分析天平:德国DENNER公司产品;96孔培养板:美国Costar公司产品;5810R离心机:德国EPPENDORF公司产品。
13 主要试剂配制
RPMI-1640培养液:取RPMI-1640粉剂104?g加入三蒸水1000?mL,NaHCO3 20?g,Hepes 27?g,测pH值为73,滤过除菌分装;新生牛血清:56?℃水浴30?min灭活后分装,-20?℃保存;5?g/L MTT染液:200?mg MTT充分溶解于40?mL 001?mol&#12539;L-1磷酸盐生理盐水缓冲液(PBS),滤过除菌后4?℃避光保存;含体积分数为1%吐温80的RPMI-1640培养液:取99?mL RPMI-1640培养液,加入1?mL吐温80,滤过除菌,4?℃避光保存备用;莪术油液:取08?mL?1?g/L莪术油,10?mL吐温80,9892?mL RPMI-1640培养液,配成800?mg/L莪术油(含1%吐温8