细菌简单染色、革兰氏染色.doc

细菌简单染色、革兰氏染色本实验报告由翼知特别贡献一、,染色原理和染色的基本操作技术,从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。(油镜)的使用方法和无菌操作技术。二、染色原理由于微生物细胞含有大量水分,对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,机体是无色透明的,与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以,微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基,在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。经测定,细菌等电点pH在2-5之间,故在中性、碱性或偏酸性溶液中,细菌的等电点均低于上述溶液的pH值,所以细菌带负电荷,容易与带正电荷的碱性染料结合,故用碱性染料染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同,故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。三、染色方法(一)简单染色法简单染色法又叫作普通染色法,只用一种染料使细菌染上颜色,如果仅为了在显微镜下看清细菌的形态,用简单染色即可。(二)复染色法用两种或多种染料染细菌,目的是为了鉴别不同性质的细菌,所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。革兰氏染色法:不仅能观察到细菌的形态,而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。四、、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯等。、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红(沙黄):表皮球菌、变形杆菌五、实验内容与步骤(一)细菌的简单染色步骤涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→,在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水,将接种环在火焰上烧红,待冷却后从斜面挑取少量菌种(表皮球菌或变形杆菌)与玻片上的水滴混匀后,在载玻片上涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。,有时为了使之干得更快些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~次,共约2~秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种)一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。,置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。,并用铅笔绘出细菌形态图。(二)细菌的革兰氏染色步骤涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥