微生物限度检查法验证.doc

氟康唑胶囊 规格:::氟康唑胶囊()由,批号::枯草芽孢杆菌((B)63501)、金黄色葡萄球菌((B)26003)、大肠埃希菌        ((B)44102)、白色念珠菌((F) 98001)。均由中国药品生物制品检定所提供。:营养肉汤培养基,批号:100226;改良马丁培养基,批号:100610;营养琼脂培养基,批号100622;玫瑰红钠琼脂培养基,批号:100603胆盐乳糖培养基,批号:1003172;-蛋白胨缓冲液,批号:100708;以上均由北京三药科技开发公司生产。:中国药典2010年版二部有关微生物限度检查法方法验证试验。:(1)±℃培养18~24h,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物1ml+%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-4~10-6,细菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。(2)±℃培养18~24小时的白色念珠菌改良马丁培养基的液体培养物1ml+%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-6,细菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。  取供试品10g,-蛋白胨缓冲液适量至100ml成1:10的供试液,低速离心(500r/min)3分钟,取上清液为供试液(1),再取供试液(1)2ml用缓冲液稀释成20ml,为1:100的供试液(2)。:(1)试验组:(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌):分别取1:10的供试液(1)1ml,每膜用300ml缓冲液(每次约100ml)冲洗,冲洗最后一次结束时加入50~100cfu/ml试验菌株,菌面朝上放入琼脂培养基平皿中,置规定温度培养24~48小时观察,结果见表1。(白色念珠菌):取1:10的供试液(1),50~100cfu/ml试验菌株同时加入平皿中立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72小时观察,结果见表1。(2)活菌组:测定每一菌株的试验菌数。(3)供试液对照:按照试验组同法操作,测定供试品本底菌数。(4)稀释剂对照组:用相应的稀释液替代供试品,加入试验菌50~100cfu/ml,按试验组的供试液制备方法和菌落计数数方法测定其菌数。。表1、氟康唑胶囊菌落计数方法的验证结果菌种试验次数试验组菌液组供试品对照组稀释剂对照组回收率(%)稀释剂对照组试验组大肠埃希菌(10-6)156670629384258790739273362780759679金黄色葡萄球菌(10-6)164820738978273860809385369840708382枯草芽孢杆菌(10-4)166790698784263760699183369780709088白色念珠菌(10-6)154690568178259710638983350700517371        从表1结果可以看出:采用上述方法检验氟康唑胶囊供试品,人工污染4株代表菌株该供试品对各菌株的回收率试