利用hplc进行绣球花属可溶性糖测定的3种提取方法比较.doc

利用HPLC进行绣球花属可溶性糖测定的3种提取方法比较利用HPLC进行绣球花属可溶性糖测定的3种提取方法比较论文导读::通过利用水、酶、酒精3种不同介质,分别对绣球花的芽和茎段样品进行萃取,利用HPLC对样品中的葡萄糖、蔗糖、果糖进行测定分析。结果显示:相同植株的相同处理下,还原性可溶性糖与非还原性可溶性糖的处理结果间存在差异;酒精提取法与酶解提取法具有较一致的结果。综合操作方法等因素,酶解法是利用HPLC进行绣球花属(Hydrangeamacrophyllaser.)植物糖测定的最适宜的样品提取方法,其次为酒精提取法。论文关键词:绣球花属植物,可溶性糖测定,HPLC,3种提取方法可溶性糖的含量变化不仅影响到果实的品质,其与植物的抗逆性也有着重要的联系[1]。JohsBakHenriksena1961年试验显示小麦幼苗中糖含量与抗寒性有密切关系[2]。王孝宣等1998年对番茄6个不同耐寒性品种的可溶性糖含量测定表明,低温下可溶性糖的含量与品种的耐寒性呈显著或极显著正相关[3]。范月仙等以9个不同抗冷级别的棉花幼苗为材料,经低温处理后测定可溶性糖含量变化,结果显示同一抗冷级别的不同品种的可溶性糖的平均提高率与抗冷性成明显的正相关[4]。可溶性糖测定方法通常有滴定法、蒽酮法、高液相色谱法(HPLC)、气象色谱法(GC)等。由于利用HPLC(High-performanceliquidchromatography)进行测定分析可以较快捷、准确地获得试验结果,因此越来越多地被应用到蔬菜、果树等农作物的可溶性糖含量的测定中[5][6]。而在生物样品测试中,样品处理后内含物的提取方法和提取条件的选择是分析方法研究的重要内容之一,它与分析方法的选择性、精密度和回收率紧密相关[7]。对于利用HPLC测定中的样品提取方法比较的研究报道较少。XiaoqiZhang等1999年对碳水化合提取方法比较试验结果表明,不同提取方法下蛋白质的含量变化达到8-50%,存在很大差异[8]。晏桂敏等对山茱萸中马钱苷含量测定的样品预处理方法进行了比较[9]。宋瑾等[6]2007年利用HPLC对葡萄中可溶性糖进行的测定中,在参考Shiraishi(1993)[10]的方法上对提取方法稍微进行了改进。本研究参考DaleSmith[11的实验方法,通过采用酶解(EnzymeExtraction)、酸萃取(AcidExtraction)、水解(WaterExtraction)3种不同方法对样品进行了提取农业论文,利用HPLC对绣球花的芽及茎段进行了可溶性糖提取方法的比较试验,以找到适宜利用HPLC进行可溶性糖分析实验中样品提取方法,对园艺植物抗寒性研究中内含物质的测定具有参考价值。1、,样品分别于2010年取自经不同低温处理的绣球花茎段,分别取芽及节间部分(3cm左右)经高温干燥处理后备用。选取10个不同低温处理的样品,分别用剪刀先将茎段及较大的芽体做初步破碎,放入2ml的Eppendorf管(微量离心管)中,经RETSHMM200台式高速振荡器充分研磨。研磨设置频率及时间分别为:芽20F,3M;茎25F,10M。取充分研磨后的样品分别进行称重。芽:每参试样品3种处理,每处理2次重复,每处理10mg干物质。茎:每参试样