小鼠骨髓细胞微核试验.ppt

小鼠骨髓细胞微核试验一、实验目的掌握哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的原理和方法了解微核试验的意义及应用二、实验原理微核(micronucleus)细胞主核之外,大小为细胞直径1/20-1/5圆形或杏仁形,边缘光滑整齐染色与主核一致一个细胞内可以存在一个或多个微核二、实验原理微核成因染色体或染色单体的无着丝点断片纺锤丝受损而丢失的整个染色体细胞分裂后期遗留在胞质中,单独形成规则的次核植物细胞微核实验(蚕豆根尖)淋巴细胞微核实验双核微核实验小鼠骨髓微核实验嗜多染红细胞(PCE)嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞,由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段特点:、易识别微核(有核细胞中微核与正常核叶及核的突起难以鉴别),染色后成灰蓝色(区别于成熟红细胞,其无核糖体、染色呈淡橘红色),满足实验计数的要求三、意义及应用检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。检测能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物(DNA断裂剂和非整倍体诱变剂)。辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。四、器材及试剂器材:手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器试剂:小牛血清、生理盐水、Giemsa贮备液五、操作步骤实验动物的选择及处理动物选择:大、小鼠,小鼠最常用,18-20g,7~12周龄,每组10只,雌雄各半。剂量选择:以1/5LD50为最高剂量组,下设3-4个剂量组,同时设阳性和阴性对照。染毒途径:经口、经皮、经呼吸道、注射。染毒次数:多次染毒法(每天染毒一次,连续4天,第五天取样)两次染毒法(第一次染毒24h后进行第二次染毒,6h取样)五、操作步骤本次实验染毒处理:环磷酰胺剂量:(腹腔注射)次数:多次染毒法(4次)----最佳浓度及作用时间