人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及鉴定.pdf

滨州医学院学报年月第卷第期,.,.,. · ·
· 论著·
人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的
构建及鉴定
张小华刘向勇。王跃嗣牛新华
滨州医学院生物技术教研室烟台市;滨州医学院细胞生物学教研室
【摘要】目的构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体—。方法扩增人酸性成纤维细胞生长
因子基因,和Ⅲ双酶切后克隆入真核表达载体,构建真核表达载体—,并
经限制性酶谱分析和测序对重组表达载体的正确性进行鉴定。结果重组真核基因表达载体—经限制
性内切酶路Ⅱ和Ⅲ酶切, 电泳显示的目的片段和的载体片段,重组载体经
测序显示所克隆的基因核苷酸顺序与中记载的序列一致。结论本实验成功构建人酸性成纤维细胞
生长因子真核表达载体,为进一步研究的功能奠定基础。
【关键词】人酸性成纤维细胞生长因子;载体;真核表达载体
【中图分类号】【文献标志码】【文章编号】


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成纤维细胞生长因子, 为深入开展的功能研究奠定基础。
是一个与多种中胚层及神经外胚层来源细胞材料与方法
的细胞分化和增殖密切相关的蛋白质家族。酸生成. 主要试剂、菌株及质粒酵母粉、蛋白胨、氯化
纤维细胞生长因子, 钠上海生物工程公司,含基因质粒—
是家族的主要成员之一。人公司,编号:,大肠杆菌
,主要分、.真核表达载体、
布在脑组织、视网膜、肾上腺和骨骼等部位,在加速聚合酶、限制性内切酶和、
创伤愈合及组织修复、促进骨骼生长以及营养神经连接试剂盒、凝胶回收试剂盒均购自
等方面发挥广泛的生物学效应。因此,目前有关人公司。仪公司、电泳
酸性成纤维细胞生长因子的功能研究得到成像装置公司、测序仪
极大的关注。本研究利用现代基因工程手段构公司。
建人酸性成纤维细胞生长因子真核基因表达载体, .表达载体的构建
基金资助项目:国家自然科学基金,滨州医学院科技计划
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引物委托上海博亚生物公司合成。上游引物和
:,一型序列自动分析仪进行序列测定,将
下游引物—:.. 测序分析结果与中报道的序列进行比对。
基因反应结果
条件:℃预变性,变性. 复. 扩增基因的琼脂糖凝胶电泳检测
性,【延伸;反应进行个循以合基因质粒—为模板,用
环,最后一个循环延伸时间为。
反应体系:质粒模板, 基因。琼脂糖电泳显示产物特异性较好,
聚合酶,,×缓冲液,引物大小约图,与理论预期结果一致。
.,引物—,双蒸水. 重组表达载体..的酶切鉴定
。反应产物经.% 琼脂糖凝胶电泳后,采纯化的基因片段经和双酶切
用大连宝生物凝胶回收试剂盒回收纯化—后,定向克隆入真核表达质粒—。对可能
基因片段。插入目的基因的重组质粒进行和
.. 基因与载体的连接及转化采用大双酶切鉴定,酶切产物经琼脂糖电泳显示包
连宝生物连接试剂盒,将—载体和括的载体片段和的目的片段图
基因的和双酶切产物连接产,与预期结果一致,将该重组表达载体命名为
物热转化至大肠杆菌中,涂布氨苄抗性。
平