表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究.pdf

扬州大学
博士学位论文
表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究
姓名：甘军纪
申请学位级别：博士
专业：兽医博士
指导教师：刘秀梵
201012
表达鸡新城疫病毒基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究摘要博士研究生：甘军纪导师：刘秀梵教授单表达和共表达虷蛑刈榧Χ徊《净钜呙绲拿庖咝Я比较试验鸡新城疫是由新城疫病毒鸬募仪葑钛现氐拇静≈弧的病毒囊膜含有鲋饕5奶堑鞍祝慈诤系鞍和血凝素一神经氨酸酶蛋白，它们都被用于重组鸡痘病毒疫苗的研究。本研究从我们实验室已构建的单表达、共表达新城疫病毒诤系鞍和血凝素一神经氨酸酶蛋白基因的重组鸡痘病毒中筛选一个作为疫苗候选株，进一步完善实验室试验，并在跫完成中间试制，为新城疫重组鸡痘病毒活疫苗顺利进入临床试验打好了基础。为评价母源抗体对抗新城疫重组鸡痘病毒活疫苗免疫效力的影响，本研究用单表达、共表达騐型病毒闒、基因的活疫苗．和油乳剂灭活疫苗分别免疫日龄商品蛋鸡，重组鸡痘病毒疫苗的免疫剂量均为庖吆分别用不同强毒株攻毒。其中旯ザ镜拿庖弑；ぢ史直鹞％、．ァ％、．ィ欢鳽株攻毒的免疫保护率分别为．ァ％、．ァァＳ帽泶锛基因的重组鸡痘病毒．．雛:免疫没有提高．疫苗的免疫保护力。试验结果表明，单表达基因的重组鸡痘病毒．可作为活疫苗候选株，为重组鸡痘病甘军纪：表达鸡新城疫病毒基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究
表达新城疫病毒基因的重组鸡痘病毒的部分生物学特性研究表达新城疫基因的重组鸡痘病毒活疫苗的免疫持续期和加强免疫研究重组鸡痘病毒活疫苗旧ǹ瞻呒剖ǖ慕毒活疫苗的进一步应用性开发奠定了基础。为了评价转基因对鸡痘病毒镅匦缘挠跋欤ü缇倒鄄熘刈榧痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞峁砻髟贔中插入D一神经氨酸酶蛋白基因后，不改变的形态、病毒成熟过程。．与贑上的产量无显著差异。．接种日龄鸡胚，在尿囊膜瞎鄄斓降湫投话呋蛩祝ε咦钚「腥玖俊免疫荧光试验证明，．在洗ù芪榷ū泶颪抗原。接种焖儆盏糔抗体应答，免疫芎笸耆ū；强毒攻击。为了评价表达新城疫病毒D亍窬彼崦虻闹刈榧Χ徊毒钜呙绲拿庖叱中诤图忧棵庖叨砸呙缑庖咝ЯΦ挠跋臁Ｓ一删活疫苗免疫日龄Γ穑纯杉觳獾絅抗体应答，对慷綟。。Ｖ旯ザ颈；ぢ蚀％。一次免疫周后，对慷竟セ依然提供完全保护。鸡痘病毒呙缑庖周，再接种一活疫苗，攻毒保护率降低至％。相反，庖周，随后二次免疫可显著提高对奶逡好庖哂Υ鹚尸．訬强毒攻击的保护率没有影响。结果表明，表达基因的重组鸡痘病毒活疫苗，能够快速建立坚强免疫力，免疫持续期至少可达周，～的二次免疫可以提高疫苗的免疫力。建立了一种简易的携带基因重组鸡痘病毒活疫苗的旧空斑计数法。接种次代鸡胚成纤维细胞后，加／於┕潭液室温固定偌／旧婀梗怪孟晕⒕迪轮苯蛹扬州大学博士学位论文一
甘军纪：表达鸡新城疫病毒蛑刈榧Χ徊《緖⋯染细胞，加适量的フ崽且煌阎谭郏婧蠖掣伞９采批胛—冻干疫鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的中试生产关键词：新城疫病毒；重组鸡痘病毒；持续期；加强免疫；空斑计数；中试生产凸社数蓝染空斑。染色空斑计数法的空斑数是不染色直接计数法的—倍。该方法在重组鸡痘病毒活疫苗研究及其工业化生产检验中具有较大的应用价值。为了给临床试验提供疫苗，在跫陆辛思π鲁且咧刈榧Χ徊《净钜呙玁狧的中试生产。魑V泼绮牧希嘌F浚．／细胞接种毒种#痟旋转培养，待细胞病变达到％，收获感苗，质量指标全部达到标准要求。秆〕龅ケ泶颪虻闹刈榧Χ徊《一魑R呙绾蜓≈辍畆与亲本毒株在赴诘牟《拘翁⒎敝撤绞揭约安《产量没有明显变化。畆活疫苗，能够快速建立坚强免疫力，免疫持续期至少可达周。畆的二次免疫可以显著提高疫苗的抗体应答。⒘艘恢旨蛞住⒖焖佟⒚舾械闹刈榧Χ徊《净钜呙绲腦染色空斑计数方贕条件下中试生产了鷕—疫苗。法。，海日
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