噬菌体治疗耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染研究.pdf

华中科技大学
硕士学位论文
噬菌体治疗耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染的研究
姓名:胡北
申请学位级别:硕士
专业:普通外科学
指导教师:严群;龚建平
20060401
中文摘要噬菌体治疗耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染的研究严群龚建平华中科技大学同济医学院附属同济医院普外/分子医学中心目的:分离并筛选出宽噬耐亚胺培南铜绿假单胞菌噬菌体,研究其在动物感染模型中的抗感染潜能、代谢机制并分析其作用机制。方法:从医院污水中分离出耐亚胺培南铜绿假单胞菌噬菌体并进行纯化、筛选,获得宽噬耐亚胺培南铜绿假单胞菌噬菌体。以/∈蠼⑷砀腥灸P停应用筛选出的宽噬噬菌体经腹腔注射进行治疗。观察疗效及其在体内的代谢情况、有无毒副作用等。结果:分离并筛选出晗喽怨闫椎氖删錎、,显著提高感染小鼠生存率。延迟治疗∈比杂屑樱サ纳媛省噬菌体在小鼠体内可以保持在较高浓度直至细菌被清除,且其对机体没有明显的毒副作用。结论:所筛选获得的宽噬噬菌体裂解性较强、裂解谱较宽,对宿主菌吸收率较高,潜伏期较短,具有强大的体内、体外抗菌效用。通过对小鼠生存率、噬菌体在体内分布及机体对噬菌体的免疫反应等指标的观察分析,噬菌体制剂简捷高效,对机体正常组织无毒副作用,从而为临床治疗全身或局部耐药性铜绿假单胞菌感染提供了新途径。关键词:动物实验噬菌体胡北亚胺培南铜绿假单胞菌感染华中科技大学同济医学院硕士学位论文
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近年来,由于抗生素的滥用导致细菌耐药性不断增长,使得细菌感染性疾病特别是耐药性细菌的感染问题再度成为临床治疗的全球性难题。耐药性根据其发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性。自然界中的病原体,如细菌的某一株可存在天然耐药性。当长期应用抗生素时,占多数的敏感菌株不断被杀灭,耐药菌株就大量繁殖,代替敏感菌株,而使细菌对该种药物的耐药率不断升高。病原体对某种药物耐药后,对于结构近似或作用性质相同的药物也可显示耐药性,称之为交叉耐药莩潭鹊牟煌钟型耆ń徊婺鸵┖筒糠纸叉耐药之分。细菌一般通过下述方式获得抗生素耐药性:二分裂阶段通过代与代之间进行传递和自发的基因突变或从附近其它细菌细胞上获取耐药性基因。随着抗生素的应用日益广泛,细菌对一些常用的药物呈现不同程度的耐药性。对于那些应用时间越长,使用范围越广泛的药物,细菌的耐药性往往越严重。当前,在世界范围内引起广泛关注的耐药性革兰氏阳性球菌包括:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐青霉素肺炎链球菌、耐万古霉素肠球菌及耐万古霉素金黄色葡萄球菌:⒊隼矗捎谛滦药物的开发周期过长,且细菌在短期之内又可以发生对新型药物的耐药,因而抗生素的更新速度难以赶上细菌耐药性的增长,我们即将面临着“前抗生素时代”无药可用的境地。铜绿假单胞菌是重要的院内感染致病菌之一。我国全国性医院内病原菌耐药,菹允荆捍年到年,铜绿假单胞菌在所有院内感染革兰阴性菌中排第弧】移淠鸵性呈不断升高趋势。亚胺培南唐访禾┠是目前临床上治疗绿脓杆菌感染的有效药物之一,但亚胺培南的大量使用,已使绿脓杆菌产生了耐药性,对亚胺培南的敏感性由年的%降至年的%。且耐亚胺培南铜绿假单胞菌更易发生其他抗生素耐药鸬牧俅哺腥境R蚩股氐难∮闷分纸仙佟病人的基础状况较差等往往导致治疗的失败。因此,亟待寻找新型抗感染物质。噬菌体作为一种有效的生物学治疗手段重新得到人们的重视【俊S肟股叵前言性监钡华中科技大学同济医学院硕士学位论文
比,噬菌体治疗具有如下优点:可特异性杀伤病原菌,而不会造成二重感染;体内应用过程中,噬菌体数目可不断扩增,且只在感染部位扩增:无抗生素可能产生的毒副作用等等。噬菌体分为烈性噬菌体及温和性噬菌体,前者可在敏感宿主菌内增殖,并使之裂解,亦称为毒性噬菌体。后者基因组整合于宿主菌基因组中,成为细菌囊徊糠郑坏ザ栏粗疲删寤蜃榈南妇莆H茉韵妇已带有前噬菌体的细菌能抵抗相应毒性噬茵体的溶菌作用。鉴于两者的特点,噬菌体用于治疗过程中,必须选择烈性噬菌体。噬菌体发现者之一芼早在二、三十年代就致力于用噬菌体来治疗感染性疾病并取得一定成果。但长期以来,噬菌体宿主谱专一的特点限制了其在临床上的大规模应用。在抗生素出现以后,由于其快捷、高效、简单的优势,迅速取代噬菌体作为最常用抗感染物质,而噬菌体的应用基本处于停滞状态。在本实验中,我们从医院污水中分离到了野生状态的噬菌体,对其进行了宽噬株筛选,成