铜绿假单胞菌耐亚胺培南现状与分子水平研究.pdf

武汉大学
硕士学位论文
铜绿假单胞菌耐亚胺培南现状与分子水平研究
姓名:朱琴
申请学位级别:硕士
专业:临床检验诊断学
指导教师:彭少华
20040410
摘要
目的探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌在医院内的感染现状及耐药谱特性,
以利于临床合理选用抗生素选择基于肠杆菌科基因间重复一致序列
的聚合酶链反应印
分型方法,对耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床株进行分子生物
学分型,以监测耐药菌株的流行状况探讨并建立可在临床微生物室常规应
用的一种检测产金属一内酞胺酶菌株的纸片协同试验方法探讨铜绿假单胞
菌临床分离株中金属一内酞胺酶流行的主要基因型,并分析产酶株耐药特性。
方法用型全自动细菌分析系统筛选武汉大学人民医院
年月年月期间耐亚胺培南铜绿假单胞菌,用琼脂稀释法检测耐药菌株
的最低抑菌浓度采用分型
方法对临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌的进行扩增,用软
件分析扩增产物电泳图谱,得到菌株间相似性聚类图以头抱他咙、头抱瞳
和亚胺培南为金属一内酞胺酶底物,分别以乙二胺四乙酸二钠和
琉基丙酸为金属压内酞胺酶抑制剂,在平板上用纸片扩散法对耐亚胺培南
铜绿假单胞菌进行协同试验采用金属一内酞胺酶流行基因型别的引物对耐
亚胺培南铜绿假单胞菌进行扩增并对产物进行测序,确定本地区金
属内酞胺酶流行的主要基因型,并对其耐药性进行分析。
结果年、年分别从本院临床各类标本中分离到铜绿假单胞菌
株、株,其中耐亚胺培南菌株数分别为株株。总分
离率为。其来源按标本类型来分以痰液最多,占,按病区来
分以重症监护病房最高,占。体外药物敏感试验所种抗菌
药物中,耐亚胺培南铜绿假单胞菌对氯霉素耐药率最高,达对头抱毗肪、
氨曲南和阿米卡星的耐药率较低,分别为和对其余抗生素
耐药率均在之间方法能很好的对铜绿假单胞菌进行分
子生物学分型,株耐药菌分为型。头抱他淀、头抱噬脂和亚胺培南三者
中任一药敏纸片与含酶抑制剂纸片间出现抑菌环扩大现象为协同试验阳性,提
示受试菌产金属一内酞胺酶。在株受试菌中,分别以和疏基丙酸
为酶抑制剂进行协同试验,结果一致,阳性均为株,但用做酶抑制剂
产生的协同效应更清晰明显株协同试验阳性菌株基因扩增阳性,
其他菌株扩增均阴性。将扩增阳性产物纯化后进行测序,经序列同源
性比较,证实株菌所产金属一内酞胺酶基因型均为型。产酶株对临床常
用的一内酞胺类抗生素均不敏感,对非一内酞胺类抗生素如环丙沙星、庆大霉
素和氯霉素也高度耐药,对单环内酞胺类抗生素氨曲南和阿米卡星相对较
敏感。
结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌在武汉大学人民医院内的分离率有随年
度增加趋势,其主要来源为病房和老年病房,主要感染部位为呼吸道和伤口
分泌物耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药现象十分严重,治疗此
类细菌感染宜参考微生物室的细菌药敏结果,选用敏感的抗生素,并对其加强
临床检测和监控分型技术简便易行,适合于医院感染菌株的分
子流行病学研究,武汉大学人民医院年分离的株耐亚胺培南铜绿
假单胞菌被分为型,其中


分别是同一克隆的耐药菌株。以为酶抑制剂的纸片
协同法是一种简便、敏感的筛选产金属内酞胺酶细菌的检测方法,可作为临
床微生物室常规初筛试验武汉大学人民医院临床分离铜绿假单胞菌所产金
属一内酞胺酶为型。产酶株呈高度多重耐药,应注意对其进行临床检测
和监控。
关键词铜绿假单胞菌耐药性流行病学一内酞胺酶基因型
尸


一
尸








一
郑重声明
本人的学位论文是在导师的指导下独立撰写并完成的,学位论文没有剿窃、
抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为,本人愿承担由此而产生的
法律后果和法律责任,特此郑重声明。
攀琴
学位论文作者签名
斗年夺月了口日
引言
铜绿假单胞菌属假单胞菌属,广泛分布于自然界、正常人皮肤、肠道、呼
吸道、医院病房及医疗器械等,是目前医院内感染的主要致病菌之一。近年来,
由于临床上广谱抗生素、激素及免疫抑制剂的广泛应用,以及各种侵袭性诊断
和治疗手段的不断增加,铜绿假单胞菌在医院感染中占有越来越重要的地位。
该菌对多种抗菌药物表现为天然或获得性耐药,故其所致感染可供选择的有效
抗菌药物甚少。目前临床上使用抗多重耐药铜绿假单胞菌感染较为有效的药物
为亚胺培南,但随着其在临床上的广泛应用,耐药率不断上升,对亚胺培南耐
药的铜绿假单胞菌在临床上具有更大的危险性,因此,对其进行流行病学监测
尤为重要。
对耐药菌株进行分子生物学分型是流行病学监测的一种重