RIPA裂解液中.pdf

北京雷根生物技术有限公司


RIPA 裂解液(中)
简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液（中）
(RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液，其裂解强
度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(弱)。所获得的蛋白质可用于 Western，免疫沉淀
(Immunol Precipitation，IP)等。
Medium RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris 、NP-40、sodium deoxycholate 等组成，
并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

组成：
编号
PS0012 Storage
名称
Medium RIPA Lysis Buffer 100ml -20℃

PMSF(100mM) -20℃

使用说明书 1 份

操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
1、 取 Medium RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。
3、 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Medium RIPA
Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解 15～
30min，通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。
4、 4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、 取 Medium RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF终浓度为 1mM。
2、 低速离心