实验一 还原糖和总糖含量的测定.doc

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实验一 还原糖和总糖含量的测定
（3,5-二硝基水杨酸比色法）
一．目的
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二．原理
在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．
：
（1）25ml刻度试管 （2）玻璃漏斗 （3）三角瓶 （4）100ml容量瓶3个 （5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml） （6）恒温水浴 （7）沸水浴 （8）电子天平 （9）分光光度计
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（1）1mg/ml葡萄糖标准液 （2）3,5-二硝基水杨酸试剂 （3）碘碘化钾溶液 （4）酚酞指示剂 （5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH
：食用面粉
四．操作步骤
：取7支25ml刻度试管，编号，按如下操作。
操作项目
管 号
0 1 2 3 4 5 6
葡萄糖标准液（ml）
0
蒸馏水（ml）
2 1
3,5-二硝基水杨酸（ml）

吸光度（A540）

将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。

（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml定容过的水解液，移入另一100m