雌激素方法规范.doc

地表水中六种雌激素化合物分析规范注:本方法适用于地表水、(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)和作为药物使用的人工合成的雌激素类药物己烯雌酚(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)、乙烷雌酚、炔诺酮等在极低的环境浓度(ng/L)下就可能对生物体造成危害。引起了世界各国的广泛关注。但由于研究相对滞后,美国国家环保局、世界卫生组织和世界动物基金会均未对该类物质作出明确的规定。雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、己烯雌酚(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)是比较常见和典型的内分泌干扰物质,本研究以上面六种雌激素为目标化合物。(Methanol),HPLC级(美国FisherScientific公司);丙酮:色谱纯(TEDIA);正己烷(n-Hexane),农残级(美国FisherScientific公司);叔丁基甲醚:,US;硅胶(60-200目),超纯(ANICS);中性氧化铝(50-200目),(ANICS);无水硫酸钠,优级纯,经450℃焙烧12h后置于密封广口瓶中保存备用;雌激素分析用标准物质:衍生化试剂:N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺,简称BSTFA(FLUKA),TMSI;EE(乙炔基雌二醇),ALDRICH;E1(雌酮),SIGMA;E2(雌二醇)MERCK;E3(雌三醇),FLUKA;EV(戊酸雌二醇)SIGMA;DES(己烯雌酚)FLUKA。剪刀、滤纸、镊子及药匙(硅胶柱净化所用):以二氯甲烷超声清洗15min两次、正己烷超声清洗15min一次;首先硅胶和氧化铝先使用二氯甲烷抽提72小时,然后硅胶在180±2℃、氧化铝在250±2℃分别活化12h(activate);待冷却至室温时,称重后装入大口锥形瓶(250或500mL),加入其重量3%的蒸馏水去活性(deactivate),添加过程中应用滴管逐滴加入,边加边用力振摇以防止结块,并超声振荡30min;放置过夜,平衡后加入正己烷浸没其表面备用(一般也需放置过夜);玻璃滤膜,经450℃焙烧4h,准确称重,放入干燥器中放置备用。(KQ-250D型数控超声波清洗器)恒温水浴锅(中国科工卫仪器仪表公司)旋转旋蒸仪(Buchi,Vac?500/rotavaporR-200/HeatingbathB-490,Germany)氮吹仪(数控氮吹仪,KL512/5093,康林,北京)气相色谱质谱连用仪:GC6890-MSD5973(AgilentTechnologies,美国),使用G1701DAMSDChemStation分析处理数据;毛细色谱柱:HP-5石英毛细管色谱柱:30m???m液膜厚蠕动泵,玻璃滤膜支架,直径50mm×(MillporeCo.,北京联星事业公司代理)SPE固相萃取小柱(HLB,WatersCo.)固相萃取真空装置(12小柱,)真空泵(SupcoCo.)100级超净工作室;:鸡心瓶、、8ml定量样品瓶,层析柱(长35cm,内径1cm,带活塞)、GC自动进样的样品瓶。常规玻