葡萄糖微生物限度检查法分析方法验证.doc

葡萄糖微生物限度检查法分析方法验证.doc目录
A、验证方案
概述
适用范围
验证目的
验证小组及职责分工
验证小组
职责分工
验证内容
漏项与偏差及采取的纠偏措施
验证结论
验证方案批准
B验证报告
概述
适用范围
验证目的
验证小组及职责分工
和试验组一样稀释级别的供试液 1ml,加入平皿中，平行操作4份，2份加入营养琼脂培
养基并培养，另2份加入玫瑰红钠琼脂培养基并培养。
d稀释剂对照组
用吸管分别取稀释液 1ml和含试验菌50〜100cfu的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽 孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液，置平皿中，每种试验菌平行测定两份。前 3种菌加入
平皿中并并加入营养琼脂培养基，后 2种菌加入平皿中并加入玫瑰红钠琼脂培养基。
e阴性对照
-蛋白胨缓冲液1ml置平皿中，分别加入营养琼脂培养基 和玫瑰红钠琼脂培养基并培养。

独立平行操作3份。分别将玫瑰红钠琼脂培养基在 C培养72小时，逐日计数，以 72
小时的菌落数报告，营养琼脂培养基在 C培养48小时逐日计数，以48小时的菌落数报告。

试验结果
试验组 菌落计数（cfu/ml ）
实验次数
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
1
2
3
平均菌落数
菌液组
菌落计数（cfu/ml ）
实验次数
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
平均菌落数
供试品对照组
菌落计数（cfu/ml ）
实验次数
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
平均菌落数
稀释剂对照组 菌落计数（cfu/ml ）
实验次数 大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉
平均菌落数
试验组的回收率（% =
试验组平均菌落数-供 试液对照组平均菌落数 冲
菌液组平均菌落数 100%
稀释剂对照组的回收率（
稀释剂对照组平均菌落 数
% 一 x 100%
% 菌液组平均菌落数
试验组的回收率（%
实验次数
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
3
平均回收率
稀释剂对照组的回收率（%
实验次数
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
1
2
3
平均回收率
541 培养基及稀释液
培养基
营养琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、营养肉 汤培养基。
稀释液
%氯化钠溶液、-蛋白胨缓冲液
验证试验用菌种
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ) [CMCC(B)26003]
大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(B) 44102]
试验步骤
培养基的配制和灭菌
将营养琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、营养
肉汤培养基按照购买厂家的使用说明书进行配制，在 121 C的条件下灭菌20min冷却后备用。
试验用具
将试验所用的培养皿用不锈钢培养皿消毒桶盛放，其他所需用具和溶液用牛皮纸包好，在
121 C的温度条件下灭菌 20分钟冷却后备用。
菌液制备
取经36C培养18〜24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌营养肉汤液体培养物 1ml，用
%无菌氯化钠溶液稀释制成每 1ml含菌数为10〜100cfu的菌悬液。
供试液的制备
。
活菌计数 活菌计数结果见下表
活菌计数（cfu/ml ）
10「4稀释
10「5稀释
10「7稀释
试验次数
1
2
1
2
1
2
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
验证方法
试验组
: 10供试液10ml和含试验菌大肠埃希菌的菌悬液 10〜100cfu，置
于盛放有100ml胆盐乳糖培养基中。
阴性对照组
分别取上述 : 10供试液10ml和含试验菌金黄色葡萄球菌的菌悬液 1ml 10〜
100cfu，置于100ml的胆盐乳糖培养基中。
阴性对照
-蛋白胨缓冲液10ml，置于100ml的胆盐乳糖培养基中。
供试品的测试
: 10供试液10ml，置于100ml的胆盐乳糖培养基中。

将胆盐乳糖培养基放入培养箱中，在 36 ±