斑马鱼胚胎的显微注射.docx

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实验四斑马鱼胚胎的显微注射
08生物技术刘佳一、实验目的1练习针刺细胞（未受精卵、去卵核、早期胚: .
实验四斑马鱼胚胎的显微注射
08生物技术刘佳一、实验目的1练习针刺细胞（未受精卵、去卵核、早期胚胎细胞或体外培养细胞）2、练习微吸管制备；3、掌握细胞显微移植技术（细胞核、外源基因）；4、了解显微注射的应用及注意事项。
二、实验器材及材料斑马鱼胚胎、酚红、显微镜；显微操作仪；拉针仪三、实验原理及步骤
显微注射（microinjection）技术是利用显微操作系统和显微注射技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物。它是目前基因转移效率较好的一种基因转移方法，可直接用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基因的长度不受限制，可达100kb;实验周期相对比较短。
注射过程：1、注射针内装液：使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品酚红一滴。2、注射针安装和定位：（1）将装液后的针头的游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头，再将其固定到微操作仪的托针管上；（2）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准细胞调焦；（3）移动针头并在显微镜下调整微操作仪，直到针头的阴影在视野的中心上方；（4）使用工作用放大倍数，调准细胞焦距，找到针尖。
3、显微注射：（1）使针尖对准细胞的待注射部位（细胞与针尖在同一焦面上），旋转推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）；（2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开